[发明专利]脂蛋白(a)的抗原肽、其抗体及用途

说明书

本发明涉及脂蛋白(a)抗体或其抗原结合片段，其特异性结合选自如SEQ ID NO:1～3所示的一种或更多种KIV抗原肽。使用这样的抗体可以准确地检测样本中脂蛋白(a)含量，而无需使用标准品来建立曲线。此外，本发明还涉及相应的抗原肽、核酸分子、融合蛋白和方法。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，尤其涉及一种脂蛋白(a)的抗原肽及与其特异性结合的抗体。

背景技术

脂蛋白(a)(lipoprotein(a))主要合成于肝脏，对脂蛋白(a)检测的同时结合患者症状以及其他相关诊断结果(例如，甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、同形半胱氨酸等)，可以对心血管疾病进行诊断。也就是说，准确检测脂蛋白(a)将利于心血管疾病的辅助判断。与其他脂蛋白一样，脂蛋白(a)包括一个内含胆固醇、甘油三酯、磷脂等的脂肪核。在该脂肪核外包裹有2条蛋白链，由apoB以及代表脂蛋白(a)特征的apo(a)组成，并由二硫键链接。因此，对脂蛋白(a)的检测只能针对其中的apo(a)来进行。

apo(a)是由许多小“圈”(亦称环饼结构)链接而形成的一个蛋白，根据氨基酸序列差异，其饼环结构可分为KIV-1～KIV-10型。除KIV-2型外，其他型均只有一个环饼结构，而KIV-2型在各个apo(a)中所重复的环饼数各异，其拷贝数范围可为3到40，从而导致了不同个体的apo(a)分子量从187000到662000不等。因此，KIV-2相对分子质量的不均一性使得了脂蛋白(a)免疫分析方法的准确性下降。具体而言，若抗体所识别的是多拷贝的KIV-2饼环区域，那么如果检测对象的apo(a)颗粒大小小于校准品的apo(a)颗粒大小，得到的脂蛋白(a)的检测结果就会偏低；反之，结果就会偏高。

为了克服难以准确反映脂蛋白(a)水平的问题，罗氏和电化生研均采用5个梯度不同颗粒大小的校准品。一方面，这样的方法的准确性强烈地依赖校准品所建立曲线，另一方面，制备以上校准品的过程非常繁琐，成本较高。

为了避免多个梯度的校准品的引入，理论上可以使用能识别每个apo(a)上具有单一拷贝数环饼区域(即，非KIV-2区域)的抗体来检测脂蛋白(a)的颗粒浓度。

对此，一些研究者尝试以重组KIV-1饼环为抗原进行免疫获得多克隆抗体，但由于所采用的抗原与KIV-2环饼的相似程度很高，所获得的多克隆抗体仍存在对KIV-2饼环有亲和力的情况，故无法获得真正意义上的非KIV-2特异性的抗体，不能准确反映脂蛋白(a)的水平。

此外，还有一些研究者尝试采用天然脂蛋白(a)为免疫抗原，筛选非KIV-2特异性的抗体，但由于KIV-2的多拷贝数和其与其他型KIV环饼的高相似度，使用天然脂蛋白(a)作为免疫抗原筛选非KIV-2特异性抗体的效率低下，从而无法高效地获得能准确反映脂蛋白(a)水平的抗体。

据此，在脂蛋白(a)检测领域中，存在对快速、便捷地获得非KIV-2特异性抗体的强烈需求。

发明内容

为了方便地筛选非KIV-2特异性抗体，本发明人对脂蛋白(a)中apo(a)结构进行了研究。在第一方面，本发明提供了一种抗原肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中的一项或更多项所示。

使用本发明的抗原肽并按照常规的抗体制备方法，仅需免疫若干只动物，就能获得特异性结合KIV-6/7、KIV-8或KIV-9区域，而不结合KIV-2区域的抗体。此外，这样的抗体能够用于脂蛋白(a)的检测，且与市售的商品产品相比，具有较高的可比性。进一步地，使用本发明抗原肽所获得的抗体满足试剂关于偏差程度的性能要求。

在一个具体的实施方式中，本发明的抗原肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在一个具体的实施方式中，本发明的抗原肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。