[发明专利]一种用于制备荧光探针的丹磺酰氯的合成方法

说明书

本发明公开了一种丹磺酰氯的制备方法，包括以下步骤：将丹磺酸溶于有机溶剂中，搅拌得悬浊液；依次向所述悬浊液中滴加氯化亚砜和五氯化磷，控制体系温度为40～45℃，反应4～6h；反应结束后，将反应液冷却，调节pH值为5～6，收集产物，得丹磺酰氯。本发明还公开了由丹磺酰氯制备而成的荧光探针。本发明的丹磺酰氯的制备方法，在丹磺酸的合成过程中，通过使用碳酸氢钠和氨水的混合溶剂，大大降低了硫酸二甲酯的使用量，提高了反应产率；在目标荧光化合物的合成过程中，通过加入五氯化磷催化剂，不但降低了氯化亚砜的使用量，而且使反应条件更加温和，可以在较低的温度下进行。

技术领域

本发明涉及荧光化合物技术领域，具体涉及丹磺酰氯的制备方法以及由丹磺酰氯制备而成的荧光探针。

背景技术

荧光探针是基因检测和病毒核酸检测试剂的重要组成部分。探针本身是一段DNA序列，能结合到病毒RNA反转录后的基因组上。探针上的荧光基团和淬灭基团靠近，荧光基团无法发出荧光。在PCR反应中，聚合酶合成DNA的时候路过探针会把探针切开，荧光基团和淬灭基团分开，荧光基团发出荧光。如果是阴性样品，探针无法结合，酶不能切开探针，荧光基团不能发光。小分子有机荧光染料如BODIPY、氧杂蒽、香豆素以及菁染料由于其特有的高敏感性、高选择性以及低毒性的特点，可以制备成荧光探针，直接用于生物体，有效地进行蛋白质、核酸等标记。

丹磺酰氯(二甲氨基萘磺酰氯)是一种强荧光剂，可用于测定肽链的氨基末端，它能专一地与链N-端α-氨基反应生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光。

目前，丹磺酰氯在合成过程中存在产率低、原料用量大、反应条件较为苛刻等问题。例如申请号为201210431650.2的中国专利(公开日为2013年1月23日)公开了丹磺酰氯的一种制备方法，该专利申请中，在丹磺酸的合成过程中，以碳酸氢钠的水溶液作为溶剂，硫酸二甲酯的用量大(硫酸二甲酯与劳伦酸的摩尔比为2：1)，产率低(49.3％)；在丹磺酰氯的合成过程中，采用丹磺酸与三氧氯磷为原料反应，不仅反应温度较高(在90℃下反应过夜)，且产率较低(75％)。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供丹磺酰氯的一种新的制备方法，该制备方法能够使得丹磺酰氯可以在较低的温度下合成，且降低了原料硫酸二甲酯和氯化亚砜的使用量，提高了反应的产率。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

第一方面，本发明提供了丹磺酰氯的一种新的制备方法，包括以下步骤：

将丹磺酸溶于有机溶剂中，搅拌得悬浊液；依次向所述悬浊液中滴加氯化亚砜和五氯化磷，控制体系温度为40～45℃，反应4～6h；反应结束后，将反应液冷却，调节pH值为5～6，收集产物，得丹磺酰氯。

进一步地，所述有机溶剂为甲苯。

进一步地，采用碳酸氢钠将反应液的pH值调节为5～6。

进一步地，控制体系的温度为40℃，反应4h。

进一步地，反应结束后，将反应液滴入冷水中冷却。

进一步地，所述收集产物具体为：先采用二氯甲烷萃取反应液，接着浓缩去除溶剂，产物再经石油醚洗涤。

进一步地，所述丹磺酸是经如下步骤制备而成的：

将劳伦酸溶于碳酸钠水溶液与氨水的混合溶剂中，搅拌得悬浊液，在搅拌时将悬浊液冷却到5℃以下；向所述悬浊液中滴加硫酸二甲酯，反应4～12h；反应结束后，调节反应液的pH值为6，冷却至1～5℃，析出洁白晶体，纯化后得到丹磺酸。

进一步地，所述混合溶剂中，碳酸钠的浓度为10wt％，氨水的浓度为1wt％。

进一步地，采用盐酸调节反应液的pH值为6。