[发明专利]一种血浆中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸的联合定量测定方法

权利要求书

1.一种血浆中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸的联合定量测定方法，其特征是，包括如下步骤：

1)绘制标准曲线

1-1)将丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸母液混合，配制成混合母液后，用甲醇-水溶液稀释成浓度为0.025-30μg/mL的系列工作溶液；

1-2)分别取10μL工作溶液与40μL空白血浆、20μL内标工作溶液、300μL乙酸乙酯依次混匀后进行第一次离心处理，并将第一次离心处理后的上清液进行干燥处理，接着分别用50μL有机混合液将干燥后的残留物分别复溶；然后再分别进行第二次离心处理，离心后的上清液为绘制标准曲线的样本溶液，其中标准曲线样本溶液中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸的浓度均分别为5-6000ng/mL；

1-3)分别取制备的标准曲线样本溶液进样，进行UPLC-MS/MS分析，记录标准曲线样本溶液中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸的色谱图、色谱峰面积；然后分别以标准曲线样本溶液中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸浓度与内标浓度之比为横坐标，丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸与内标的色谱峰面积比为纵坐标，采用最小二乘法进行回归运算，分别绘制得到丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸标准曲线方程；

2)血浆样本测定

取待测血浆样本进样，进行UPLC-MS/MS分析，记录待测血浆样本中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸、内标物质的色谱图、色谱峰面积；接着分别将待测血浆样本中阿司匹林、水杨酸、丹酚酸B的色谱峰面积与内标的色谱峰面积比、内标物质的浓度分别带入绘制的阿司匹林、水杨酸、丹酚酸B的标准曲线方程，计算得到待测血浆样本中阿司匹林、水杨酸、丹酚酸B的浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1-3)中所述UPLC-MS/MS分析过程中，液相色谱(UPLC)测定的色谱条件如下：流动相：0.5％甲酸(A)-乙腈(B)。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是，所述液相色谱分离过程中，流动相选择梯度洗脱：0-0.3min，95％-75％A；0.3-1.3min，75％-70％A；1.3-2.1min，70％-30％A；2.1-2.5min，30％A；2.5-2.7min，30％-95％A；2.7-4.0min，95％A。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤1-3)中所述UPLC-MS/MS分析过程中，所述质谱检测采用电喷雾离子化离子源将液相洗脱液离子化，采用负离子多反应离子监测扫描模式检测血浆样品中所述丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸和内标的含量。

5.如权利要求1-4任一项所述的方法，其特征是，步骤2)中所述待测血浆样本按照如下方法制备：将待测血浆与内标工作溶液、有机溶剂混匀后进行第一次离心处理；将第一次离心处理后的上清液干燥后用有机混合液复溶；然后进行第二次离心处理，第二次离心处理的上清液为待测血浆样本。

6.如权利要求5所述的方法，其特征是，所述有机溶剂选择乙酸乙酯、石油醚、正己烷、二氯甲烷或三氯甲烷，优选为乙酸乙酯。