[发明专利]一种血浆中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸的联合定量测定方法

说明书

本发明公开了一种血浆中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸的联合定量测定方法，包括分别绘制丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸的标准曲线，然后采用UPLC‑MS/MS分析测定待测血浆中丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸、内标物质的色谱图、色谱峰面积；根据各自的标准曲线计算获得丹酚酸B、阿司匹林、水杨酸在血浆中的含量。本发明方法用于药物代谢动力学研究，药物联合应用时，明确各药物的药代动力学规律，药物含量测定准确，分离度高，测定方法灵敏，检测效率高。

技术领域

本发明涉及一种药物在血浆中的含量测定方法，特别涉及联合用药过程中药物的联合定量测定方法，本发明属于药物代谢动力学领域。

背景技术

3500年前，苏美人和古埃及人使用柳树皮治疗高热和疼痛，从柳树皮中提取得到的具有解热镇痛疗效的主要有效成分就是水杨酸。1897年，德国化学家为了降低水杨酸对胃肠道的刺激性，给水杨酸加入了一个乙酰基团，得到乙酰水杨酸(商品名阿司匹林)，随后作为解热镇痛和抗风湿药逐渐应用于临床治疗。1971年，Smith和Willis发现，阿司匹林可以通过不可逆转的抑制环氧合酶1(COX-1)，产生抗血小板聚集作用，在预防血栓发生方面具有良好的应用前景。目前，阿司匹林已经作为心脑血管疾病的一级和二级预防药物在临床上广泛使用。特别是在心梗、卒中和血管原因死亡中应用阿司匹林二级预防的作用已经得到RCT试验的验证。临床上阿司匹林经常作为基础用药与其他心脑血管疾病药物联合使用。

现在研究表明，丹参对心血管系统作用十分明显，是目前临床治疗冠心病应用最广泛的中药材之一。丹参制剂与阿司匹林均具有抗血小板聚集的作用，临床研究显示，在常规阿司匹林治疗基础上，丹参酮IIA磺酸钠注射液可以显著减轻心绞痛症状。丹参多酚酸盐注射液是从中药丹参中提取的水溶性有效成分制成的，主要成分为丹酚酸B(又称丹参酚酸B)，具有抗血小板聚集、抗血栓形成、保护心肌细胞、抗氧化、减轻动脉粥样硬化病变等作用，在临床被广泛用于心绞痛，心肌梗死等心脑血管疾病治疗，还能有效防止急性冠状动脉事件发生。目前临床应用阿司匹林联合丹参多酚酸盐注射液治疗心脑血管疾病较为常见，但二者联合应用相互作用关系的研究则相对较少，同时，支持此两种药物代谢动力学研究的体内定量方法也未见报道。

高效液相色谱法(HPLC)是用于药物定量分析最常用的技术之一，是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱对样品进行分离的色谱方法，具有广谱性，通过联用不同检测器，如紫外检测器、荧光检测器、质谱检测器等，达到定量分析不同类型化合物的目的。特别是与质谱检测器联用——液相-质谱联用(LC-MS)分析技术在近十年快速发展，在面对成分复杂的生物样本时，展现出了高灵敏度、高通量和高选择性的分析优势，为药物体内代谢产物的分析鉴别提供了简便快速的分析方法，推动了的药物代谢动力学的发展。

超高效液相色谱(UPLC)在高效液相色谱系统的基本原理上，提高了系统压力，降低了色谱柱填料的颗粒度，从而提高了分离效能和速度。UPLC-MS/MS是指在UPLC高效分离的基础上，利用质谱法能准确测量离子质量的特性，特异性采集待测物母离子信号，并将选定的母离子打碎，特异性采集子离子信号，祛除了其他离子的干扰，又称为质谱多反应监测技术(MRM)，是目前公认的选择性最好的复杂样本分析技术之一，为药物代谢动力学的研究增添了诸多助力。

在面对生物样本分析时，除了选择合适的分析方法，还需要预处理方法将样本转化为易分析的形态。预处理的目的是减少基质中干扰待测组分的大量杂质，最大限度的使样本符合分析手段的要求。繁多的预处理过程不仅会耗费大量的时间，还可能在除去杂质的同时造成待测物的损失，增加操作误差，因此选择简便又对待测物具有高选择性的预处理方法可以使样本分析过程快速稳定，极大提高分析效率和可重复性。