[发明专利]一种透明质酸片段的新应用及稳定制造方法

说明书

本发明公开了一种透明质酸片段作为人中性粒细胞移走抑制剂、人单个核细胞移走抑制剂、人单个核细胞凋亡促进剂和/或人中性粒细胞β防卫素分泌促进剂的应用；所述透明质酸片段为使用结构上有两个结合区的透明质酸酶PH20足量或轻度过量充分酶解高或中分子量透明质酸原料制造而成的平均分子量35±8KDa的透明质酸片段；本发明还公开了上述透明质酸片段在制备治疗中性粒细胞及单个核细胞介导的炎症性疾病药物中的应用。本发明还公开了上述透明质酸片段的稳定制造方法及基于上述稳定制造方法而形成的透明质酸酶注射液及透明质酸注射液的联合应用方法。本发明通过研究发现了透明质酸片段的稳定制造方法、制造原理和抗炎机制，为其药学研究奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别是涉及一种透明质酸片段的新应用及稳定制造方法。

背景技术

目前，科学社会对于人体细胞外基质透明质酸的生理功能和药学功效还是没有统一的看法。最早的透明质酸产品都是平均分子量大于1200kDa的治疗关节炎的注射液，如Durolane and Synvisc。文献研究表明透明质酸的生理和药学功效于其分子量大小有关(1)。文献研究还表明人初乳提取的平均分子量35kDa的透明质酸片段有多种生理功能和药学功效(2、3、4、5、6、7)。人初乳提取的平均分子量35kDa的透明质酸片段在女性乳房由透明质酸酶切割制造。女性乳房是性腺，其透明质酸酶是男性性腺睾丸的精子顶体透明质酸酶PH20(8、9)。

本发明人使用重组人透明质酸酶PH20(10、11、12)6小时酶解分子量300-1600kDa的透明质酸原料，制造了平均分子量35kDa的有生物活性的透明质酸片段B-HA(13)。本发明人还使用生物活性透明质酸片段B-HA做原料，制造了1类医疗器械B-HA产品(LUQIN FoodDrug Medical Device registration number:20190021)。这些1类医疗器械B-HA产品曾被用来进行说明书外临床研究临床表现为红肿硬痛的皮肤粘膜炎症(13、14、15、16、17)。这些临床研究结果表明生物活性透明质酸片段B-HA有明确抑制临床上皮肤粘膜红肿硬痛的活性(13、14、15、16、17)，为其临床皮肤粘膜抗炎活性提供了事实依据，其临床研究结果在地方杂志进行了发表和申报了专利(13、14、15、16、17)。图1为重组人透明质酸酶PH20充分酶解大分子透明质酸原料制造的平均分子量35±8KDa透明质酸片段B-HA抑制人皮肤红肿硬痛图解，其机制需要进一步研究。

综上所述，上述现有技术对生物活性透明质酸片段B-HA的稳定制造方法、制造原理、生物活性的作用机制和新的生物活性以及潜在新临床应用的研究还有限，还需进一步研究和开发。

背景技术参考文献：

1.Cyphert JM,Trempus CS,Garantziotis S:Size matters:molecular weightspecificity of hyaluronan effects in cell biology(Review Article).Int J CellBiol 2015,2015:1-8.

2.David R Hill，Sean P Kessler,Hyunjin K Rho,Mary K Cowman,and Crol Ade la Motte,Specific-sized hyaluronan fragments promote expression of humanbeta-defensin 2in intestinal epithelium,The Journal of Biological Chemistry,2013,287(36):30610-30624.