[发明专利]一种Bet V1重组蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202010169695.1 | 申请日： | 2020-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN111304215A | 公开（公告）日： | 2020-06-19 |
| 发明（设计）人： | 李子樵;周延庆 | 申请（专利权）人： | 蓝怡科技集团股份有限公司;浙江蓝怡医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C07K14/415;C12N15/70;C07K1/22;A61K38/16;A61P37/08;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 201108 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 bet v1 重组 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种编码Bet V1重组蛋白的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括如SEQ IDNO:1所示的核酸序列。
2.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括如权利要求1所述的核酸分子；
优选地，所述重组载体的空载体包括原核载体；
优选地，所述原核载体包括pET-21a(+)。
3.一种原核表达系统，其特征在于，所述原核表达系统转染有如权利要求1所述的核酸分子和/或如权利要求2所述的重组载体；
优选地，所述原核表达系统包括原核细胞；
优选地，所述原核细胞包括原核细菌；
优选地，所述原核细菌包括大肠杆菌。
4.一种Bet V1重组蛋白，其特征在于，所述Bet V1重组蛋白采用如权利要求3所述的原核表达系统进行表达；
优选地，所述Bet V1重组蛋白包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
5.一种如权利要求4所述的Bet V1重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)将编码Bet V1重组蛋白的核酸分子插入原核载体，得到重组载体；
(2)将所述重组载体转化入原核表达系统，诱导培养；
(3)收集所述原核表达系统的培养上清，纯化后得到所述Bet V1重组蛋白。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述核酸分子如SEQ ID NO:1所示；
优选地，步骤(1)所述原核载体包括pET-21a(+)；
优选地，步骤(1)所述核酸分子插入原核载体的BamH I和Xho I限制性酶切位点。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述原核表达系统包括原核细胞；
优选地，所述原核细胞包括原核细菌；
优选地，所述原核细菌包括大肠杆菌；
优选地，步骤(2)所述转化的方法包括化学转染和/或物理转染。
8.根据权利要求5-7任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述纯化的方法包括亲和层析；
优选地，所述亲和层析采用镍柱进行。
9.根据权利要求5-8任一项所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)将编码Bet V1重组蛋白的核酸分子SEQ ID NO:1插入原核载体pET-21a的BamH I和Xho I限制性酶切位点，得到重组载体；
(2)将所述重组载体转化入大肠杆菌，诱导培养；
(3)收集大肠杆菌的培养上清，采用镍柱亲和层析后得到所述Bet V1重组蛋白。
10.一种如权利要求1所述的核酸分子、如权利要求2所述的重组载体、如权利要求3所述的原核表达系统或如权利要求4所述的Bet V1重组蛋白在制备过敏性疾病诊断试剂和/或治疗药物中的应用。
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