[发明专利]一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法在审
| 申请号： | 202010171027.2 | 申请日： | 2020-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN111676236A | 公开（公告）日： | 2020-09-18 |
| 发明（设计）人： | 尚金召;贺子桐;郑长龙 | 申请（专利权）人： | 北京达成生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/06 |
| 代理公司： | 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 11616 | 代理人： | 李朦 |
| 地址： | 101200 北京市平谷区中关村科*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 flod 蛋白 大肠杆菌 表达 方法 | ||
1.一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于，所述表达方法包括重组表达载体构建、转化、目标蛋白诱导表达，步骤如下：
(1)将FLOD基因插入到表达载体pET28a的多克隆位点，构建重组表达载体质粒pET28a-FLOD；
(2)将(1)中构建的重组表达载体质粒转入宿主细胞E.coliBL21(DE3)，获得重组菌株；
(3)对重组菌株进行诱导，表达FLOD蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于：所述FLOD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.根据权利要求1所述的一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于：所述FLOD蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.根据权利要求1所述的一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于，所述FLOD蛋白的纯化包括以下步骤：
(4)诱导表达后收集菌体并破碎细胞后，高速离心获得细胞破碎液上清；
(5)Ni-NTA树脂经过平衡液平衡后，将上清液过Ni-NTA树脂纯化，纯化后进行脱盐获得重组FLOD酶洗脱液；
(6)脱盐后收集蛋白溶液，冻干处理，即得FLOD蛋白干粉。
5.根据权利要求4所述的一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于，步骤(5)所述平衡液组成为：25mM PBS，pH 7.4，150mM NaCl，2mg/L FAD。
6.根据权利要求4所述的一种重组FLOD蛋白的大肠杆菌表达方法，其特征在于，步骤(5)所述洗脱液组成为：20mM PBS，pH 7.4，150mM NaCl，500mM咪唑，2mg/L FAD。
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