[发明专利]一种大规模回收线性化质粒的方法

权利要求书

1.一种大规模回收线性化质粒的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1，PvuI限制性内切酶酶切，线性化质粒在酶切体系中的浓度为0.6～1.7μg/μl，限制性内切酶PvuI的用量为每1μg质粒使用0.2～0.4μl的PvuI限制性内切酶进行酶切；

步骤2，酚氯仿异丙醇抽提；

步骤3，醇沉获得线性化质粒。

2.根据权利要求1所述的大规模回收线性化质粒的方法，其特征在于：所述酚氯仿异丙醇抽提包括如下步骤：

1)酶切结束后，向酶切体系中加入等体积的酚、氯仿及异丙醇的混合溶液，充分混匀；酚、氯仿及异丙醇的体积比为25:24:1；

2)于4℃，12000rpm离心10min，取上层水相；

3)向剩余有机相中加入ddH₂O，充分混匀；

4)再于4℃，12000rpm离心10min，取上层水相；

5)将步骤2)的上层水相和步骤4)的上层水相混合。

3.根据权利要求1所述的大规模回收线性化质粒的方法，其特征在于：所述醇沉方法为：首先，向步骤5)中混合后的水相中加入1/10溶液体积的3mol/L的NaAC溶液，混匀；再加入2.5倍溶液体积的无水乙醇，混匀，可见白色絮状物；再于4℃，12000rpm离心10min，弃上清液；向沉淀中加入1/2离心管体积的75％的乙醇，洗涤，然后于4℃，12000rpm离心10min，弃上清液；将沉淀置于超净台内晾干，再加ddH₂O溶解。