[发明专利]一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物及其合成方法

权利要求书

1.一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物，其特征在于：所述化合物结构式如下所示：

2.如权利要求1所述的一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物的制备方法，其特征在于：

S1、FA-OSu的合成

S11、将叶酸溶解于无水DMSO中，磁力搅拌过程中分别加入DCC和HOSu，将混合物于常温下避光搅拌10～20h；

S12、过滤不溶物，真空抽滤，并用甲基叔丁基醚洗涤滤饼，抽干成黄色粉末，得到FA-OSu；

S2、NH₂-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Rink树脂的合成；

S21、取Rink树脂置于固相反应柱中，用DCM溶胀树脂，抽掉溶液；

S22、取Fmoc-Lys(Boc)-OH、HOBt，DMF溶解，待溶解澄清后加入DIC，将混合溶液加入反应柱中进行反应，用DBLK脱Fmoc，DMF洗涤；

S23、重复S22，偶联Fmoc-Cys(Trt)-OH，得到NH₂-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Rink树脂；

S3、FA-Cys-Lys-CONH₂的合成；

S31、称取FA-OSu溶于DMSO中，将溶液加入S32制得的NH₂-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Rink树脂中，氮气鼓吹，并滴加DIEA；

S32、待滴加完毕后，保持20～35℃温度反应，并用DMF洗涤，甲醇收缩，真空干燥，得到肽树脂；

S33、将上述肽树脂加入裂解试剂，温室反应，过滤，将滤液倒入冰冻乙醚，析出黄的颗粒，离心；

S34、用乙醚洗涤，真空干燥得到粗品，通过RP-HPLC纯化，冻干得到纯度＞95％的黄色固体；

S4、Cy7衍生物的合成；

所述反应式为

S41、避光条件下，在三口瓶中加入Y-E，Y-C，乙酸酐，吡啶，开启搅拌，氮气保护下反应得到蓝色固体Y-F；

S42、取蓝色固体Y-F，加入到三口瓶中，用无水DMF溶解，在避光环境下，向溶液中加入HATU，2-马来酰亚胺三氟乙酸盐，DIEA；

S43、在氮气保护下搅拌反应，加入冰MTBE，析出蓝色固体，过滤。

S44、通过RP-HPLC纯化冻干，得到纯度＞90％的Cy7-d固体；

S5、标记物的合成Cy7-FA

S51、在避光条件下，在三口瓶中加入FA-Cys-Lys-CONH₂，用pH＝7.2的PBS与ACN混合液溶解至澄清；

S51、在S51中慢慢加入Cy7-d，氮气保护，避光反应后，过滤。

S52、通过RP-HPLC纯化冻干，得到，纯度＞95％的Cy7-FA蓝色固体。

3.如权利要求2所述的一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物的制备方法，其特征在于：所述S12中用甲基叔丁基醚洗涤滤饼1～3次。

4.如权利要求2所述的一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物的制备方法，其特征在于：所述S32的步骤为，待滴加完毕后，保持30℃温度反应，用DMF洗涤2～4次，甲醇收缩1～3次，真空干燥后得到肽树脂。

5.如权利要求2所述的一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物的制备方法，其特征在于：所述S33中的裂解试剂为TFA:Tis:H₂O:DTT＝90:2.5:2.5:5。

6.如权利要求2所述的一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物的制备方法，其特征在于：所述S34中用乙醚洗涤2-3次。

7.如权利要求2所述的一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物的制备方法，其特征在于：所述S41中氮气保护下，将反应液升温至110℃，搅拌1～2小时，反应液降至室温，将反应液滴加至乙酸乙酯中，过滤，通过RP-HPLC纯化冻干，得到蓝色固体Y-F。