[发明专利]一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物及其合成方法

说明书

本发明提供了一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物及其制备方法，所述标记物通过采用Cy7衍生物与叶酸衍生物进行迈克尔加成反应，得到粗品，再将粗品经过精制得到标记物。本发明所述的方法原料易制备，反应条件温和，收率高，为后续新药研究、药理研究提供优质的物料。

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物及其合成方法。

背景技术

荧光素广泛用于标记肽、蛋白质和寡核苷酸等，其中Cy7荧光素是体内成像应用中最常用的近红外红色荧光团的一种。

叶酸由于其分子量小、无免疫原性和稳定性好，有利于与其他基团形成化学键。叶酸对细胞表面上表达的叶酸受体具有高亲和性。细胞通过叶酸受体和叶酸的结合来实现对叶酸的摄取。虽然叶酸受体在大部分正常细胞中的表达水平非常低，但是在大量癌细胞中，常高水平表达以满足在低叶酸条件下快速分裂细胞对叶酸的较高需求。

叶酸受体(folate receptor，FR)是一种糖基磷脂酰肌醇偶联蛋白。其中FRα受体在正常组织中如脉络丛、胎盘组织及近端肾小管、膀胱上皮细胞等也可见低中度表达，而卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、肝癌、鼻咽癌等肿瘤细胞表面FRα受体数量均高水平表达。叶酸受体与叶酸及其衍生物亲和性远远超过正常细胞，更重要的是，卵巢癌肿瘤细胞表面FR的表达密度随肿瘤进展及恶性度增加而升高，因此叶酸受体成为近年来卵巢癌等肿瘤放射性核素靶向显像及治疗研究的热点，也是基于这种特性，可将显像剂、治疗药物等与叶酸偶联，靶向给予肿瘤细胞，从而应用于肿瘤的影像诊断，如核医学显像、核磁共振显像、荧光显像，和肿瘤治疗，如化疗、同位素治疗、免疫治疗、反义核苷酸治疗及基因治疗。

由于药理学性质通常在一定程度上受到将荧光团连接到任意受体结合配体的影响，并且包括结合亲和性改变以及受体(即激动剂或拮抗剂的性质)的活化等。所以为了量化所观察到的结合效果，在任何研究中了解荧光配体的药理学是重要的。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物及其合成方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物，其特征在于：所述化合物结构式如下所示：

优选地，所述的一种与叶酸受体靶向结合的叶酸荧光素标记化合物的制备方法，其特征在于：

S1、FA-OSu的合成

S11、将叶酸溶解于无水DMSO中，磁力搅拌过程中分别加入DCC和HOSu，将混合物于常温下避光搅拌10～20h；

S12、过滤不溶物，真空抽滤，并用甲基叔丁基醚洗涤滤饼，抽干成黄色粉末，得到FA-OSu；

S2、NH₂-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Rink树脂的合成；

S21、取Rink树脂置于固相反应柱中，用DCM溶胀树脂，抽掉溶液；

S22、取Fmoc-Lys(Boc)-OH、HOBt，DMF溶解，待溶解澄清后加入DIC，将混合溶液加入反应柱中进行反应，用DBLK脱Fmoc，DMF洗涤；

S23、重复S22，偶联Fmoc-Cys(Trt)-OH，得到NH₂-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Rink树脂；

S3、FA-Cys-Lys-CONH₂的合成；

S31、称取FA-OSu溶于DMSO中，将溶液加入S32制得的NH₂-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Rink树脂中，氮气鼓吹，并滴加DIEA；