[发明专利]一种碱性磷酸酶的灵敏检测方法有效
申请号: | 202010175831.8 | 申请日: | 2020-03-13 |
公开(公告)号: | CN111239094B | 公开(公告)日: | 2022-08-26 |
发明(设计)人: | 郭晓玉;郭壮壮;李金鸽;李广宝;杨怀霞 | 申请(专利权)人: | 河南中医药大学 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64;G01N1/38 |
代理公司: | 郑州中鼎万策专利代理事务所(普通合伙) 41179 | 代理人: | 徐文婷 |
地址: | 450008 河南*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 碱性磷酸酶 灵敏 检测 方法 | ||
1.一种碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将抗坏血酸2-磷酸溶液分别和一系列活性浓度梯度的ALP溶液混合,反应;
(2)在步骤(1)的反应液中分别加入4,4’-二叠氮二苯乙烯-2,2’-二磺酸二钠四水合物溶液,反应;
(3)对步骤(2)的反应液分别进行荧光测定,构建ALP活性浓度和荧光强度的线性关系;
(4)利用线性关系,得到待检测ALP溶液活性浓度。
2.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,抗坏血酸2-磷酸溶液的浓度为0.1 M。
3.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,一系列活性浓度梯度的ALP溶液的活性浓度为:5、10、20、30、40 mU/mL。
4.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,ALP溶液为ALP的Tris Buffer溶液,Tris Buffer溶液的浓度为0.1 M,含2 mM MgCl2,0.2 mM ZnCl2,pH=8.0。
5.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,4,4’-二叠氮二苯乙烯-2,2’-二磺酸二钠四水合物溶液的浓度为15 mM。
6.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,抗坏血酸2-磷酸溶液、ALP溶液、4,4’-二叠氮二苯乙烯-2,2’-二磺酸二钠四水合物溶液的体积比为1:4:4。
7.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,步骤(1)中反应温度为37℃,时间为50 min。
8.根据权利要求1-7任一项所述的碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,步骤(2)中反应温度为37℃,时间为30 min。
9.根据权利要求8所述的碱性磷酸酶的灵敏检测方法,其特征在于,荧光测定的条件为激发波长383 nm,狭缝2 nm。
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