[发明专利]一种宏基因组二代测序的建库样本的制备方法在审
| 申请号： | 202010176692.0 | 申请日： | 2020-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN111471676A | 公开（公告）日： | 2020-07-31 |
| 发明（设计）人： | 梁志坤;李贻林;吴英松;李明;杨学习;周俊华 | 申请（专利权）人： | 广州市达瑞生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 段卉 |
| 地址： | 510160 广东省广州市黄埔区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 宏基 二代 样本 制备 方法 | ||
1.一种宏基因组二代测序的建库样本的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
采集样本，并制备样本溶液；
裂解样本溶液中的宿主细胞，并消化样本溶液释放出的DNA，通过酶法和机械法进行破壁，得到样本1；
对样本溶液进行DNA酶消化，得到样本2；
将样本1和样本2合并，提取总核酸；
总核酸分为两部分：一部分去除rRNA，反转录为cDNA，与另一部分混合；
其中，裂解样本溶液中的宿主细胞的方法为，样本溶液与皂苷溶液混合，至皂苷的终质量浓度为0.22％～2.2％，孵育10～60min，再加入NaCl反应。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，利用HL-SAN Buffer和HL-SAN消化样本溶液释放出的DNA，离心，弃上清，洗涤并重悬沉淀。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，使用溶菌酶和溶胞酶进行酶法破壁。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，破壁的具体方法为：向产物中加入溶菌酶和溶胞酶，37℃30min，之后加入锆珠，用组织研磨均质仪以6M/s速度破壁30s，之后12000g离心3min，取上清。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，使用DNase I Buffer和RecombinantDNase I进行DNA酶消化。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，使用FastSelectTM RNARemoval Kit去除rRNA。
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