[发明专利]一种大黄藤茎段组培快繁方法

说明书

本发明涉及一种中药材的组织培养方法，特别涉及大黄藤茎段组培快繁方法，所述方法选取大黄藤茎端作为外植体，在超净台内依次用酒精、漂白粉溶液及升汞溶液消毒；将消毒好的茎段，接种于以WPM为基本培养基，添加NAA、TDZ及活性炭的诱导培养基内；将诱导出的丛生芽，接种于以WPM为基本培养基，添加NAA、6‑BA、KT、GA3以及活性炭的增殖培养基内；将诱导或增殖获得丛生芽，接种于以WPM为基本培养基，添加NAA、IBA、多效唑以及活性炭的生根培养基内。该方法丛生芽诱导率、生根率及成活率高于已知的文献。

技术领域

本发明涉及一种中药材的组织培养方法，属于植物组织培养及中药材种植领域，特别涉及大黄藤的组织培养方法。

背景技术

大黄藤（Fibraurearecisa Pierre.），又名黄藤、天仙藤、黄连藤、藤黄连，为防己科天仙藤属多年生木质大藤本，最初仅产区少数民族使用，用作黄色染料和治疗疮疡，上世纪中草药运动中，蒙自驻军卫生队和红河州医院发掘了黄藤的医药用途，经初步临床验证后在云南全省推广应用，很快即被1977版《中国药典》收录，是较为典型的从传统民族医药中开发现代植物药的范例。

大黄藤以藤茎入药，具清热解毒，泻火通便的功效，主要用于热毒内盛，便秘，泻痢，咽喉肿痛，目赤红肿，痈肿疮毒等症。现代医药研究表明，大黄藤内含黄藤素、药根碱、四氢巴马汀等多个生物碱、黄藤内酯等内酯类化合物、齐墩果酸等萜类化合物以及棕榈酸等挥发油，其中以黄藤素含量为最高，应用亦较为广泛。黄藤素等生物碱具有抑菌活性、抗炎作用、抗病毒、增强免疫力、提高记忆力等药理作用。目前以大黄藤药材或其提取物黄藤素为原料药的中药制剂有11个，包括复方青蒿喷雾剂、复方青蒿搽剂、消肿止痛酊、矾藤痔注射液、黄藤素分散片、黄藤素注射液、黄藤素片、黄藤素胶囊、黄藤素软胶囊、复方黄藤洗液、黄藤素栓，约45家制药企业生产，其中黄藤素片以及黄藤素胶囊生产及市场应用最为广泛。

大黄藤野生主要分布于云南东南部、广西南部及广西西南部，其中云南的红河州、西双版纳州、普洱市和临沧市分布较广，主要生于海拔180~1000米的热带、亚热带丛林、山野沟谷中，越南、老挝、柬埔寨亦有分布。由于大黄藤分布区域较为狭窄，生长周期较长，使得野生资源蕴藏量较低，同时分布较为分散。同时，现代中药制剂的不断开发及药效的认可性越来越高，大黄藤市场应用愈发广泛，人工无序采挖，大量消耗了野生植物资源，使得蕴藏量本就较低的野生资源更加匮乏。1993年后，由于原料短缺，价格逐年上涨，采挖已经扩张至老挝、越南等周边国家。2003年以来，云南红河州开始尝试了大黄藤的人工驯化种植，后云南临沧市、德宏州、西双版纳州亦先后尝试了大黄藤的人工驯化种植，已初步完成了大黄藤的种植技术、种植适应性等，同时已在红河屏边县、临沧双江县已初步形成一定规模，但目前的种植中种苗繁育技术均采用传统的种子繁殖和扦插繁殖，具繁殖速度慢，繁殖周期长、繁殖率低的缺点。

对比文件《大黄藤茎尖快繁研究》公开了一种大黄藤的组培方法，以大黄藤茎尖为外植体,通过组织培养的方法使茎尖不经愈伤直接诱导分化成苗,该方法经若干对比实验认为最佳培养基组合为MS+6-BA 0.5 mg/L+LAA 0.5 mg/L+ZT 0.1 mg/L,生根最佳培养基组合为1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L。本发明旨在该文献的基础上，通过更新培养基配方探索得到实验效果更佳的大黄藤组培方法。

发明内容

本发明针对以上所述的大黄藤现有的种苗繁育技术中存在繁殖周期长，繁殖速度慢，繁殖率低等缺点，利用现代生物技术，发明了一种组分简单、操作简便、生产周期短、繁殖率高，可为规模化种植在短期内大量提供充足、优质种苗的一种组织培养方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

1）外植体的选择：选择健壮的大黄藤植株，剪取无病虫害、未木质化的茎端10~20cm作为外植体；