[发明专利]种植体周围抗炎用融合基因、外泌体、生物涂料以及制备方法和应用

权利要求书

1.基于生物涂料的钛材料种植体的改造方法，包括以下步骤：

1）将钛材料种植体进行酸蚀，得到酸蚀后的钛材料种植体；

2）将步骤1）酸蚀后的钛材料种植体在PEI溶液中浸泡20~30min，清洗，得到吸附PEI分子的钛材料种植体；

3）将步骤2）得到的吸附PEI分子的钛材料种植体在明胶溶液中浸泡10~15min，清洗，得到负载明胶的钛材料种植体；

4）将步骤3）得到的负载明胶的钛材料种植体在抗炎外泌体溶液中浸泡10~15min，清洗，得到负载抗炎外泌体的钛材料种植体；

5）重复步骤3）和步骤4）3~5次，得到改造后的钛材料种植体；

所述生物涂料包括PEI溶液、明胶溶液和抗炎外泌体溶液；

所述PEI溶液中PEI的质量浓度为0.5~2mg/ml，所述PEI溶液的溶剂为0.15M 的氯化钠水溶液；所述明胶溶液中明胶的质量浓度为5 mg/ml，所述明胶溶液的溶剂为含有0.15M氯化钠的PBS水溶液；以蛋白质量浓度计，所述抗炎外泌体溶液中抗炎外泌体的质量浓度为100μg/ml，所述抗炎外泌体溶液的溶剂为壳聚糖溶液；所述壳聚糖溶液中壳聚糖的质量浓度为5 mg/ml，所述壳聚糖溶液的溶剂为含0.15M氯化钠的体积百分含量为1%的醋酸水溶液；

所述抗炎外泌体能够表达融合基因，所述融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述SEQ ID NO.1为基于编码IL10的CDS和3’UTR序列构成的IL10的mRNA序列；

所述抗炎外泌体的构建方法，包括以下步骤：

a）将所述融合基因克隆至pUC57载体，得到pUC57-IL10；

b）将步骤a）所述pUC57-IL10和pWPI载体酶切，连接，得到pWPI-IL10；

c）将步骤b）得到的pWPI-IL10转化入Stbl3大肠杆菌，提取pWPI-IL10；

d）将步骤c）得到的pWPI-IL10和psPAX2、pMD2G转染包装细胞HEK293细胞，得到过表达IL10的病毒载体；

e）将步骤d）得到的过表达IL10的病毒载体感染MSC细胞，培养、分离得到抗炎外泌体，获得携带IL10的mRNA序列的外泌体。

2.一种基于权利要求1所述改造方法制备得到的抗炎钛材料种植体，该种植体是经过权利要求1所述生物涂料改造的种植体，该种植体含有携带IL10的mRNA序列的外泌体。