[发明专利]种植体周围抗炎用融合基因、外泌体、生物涂料以及制备方法和应用

说明书

本发明涉及种植体周围抗炎用融合基因、外泌体、生物涂料以及制备方法和应用，属于种植体技术领域。本发明所述融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。基于本发明所述融合基因制备得到的外泌体负载于种植体上后，能够提高种植体的生物相容性，具有显著的抗炎作用。

技术领域

本发明涉及种植体技术领域，具体涉及种植体周围抗炎用融合基因、外泌体、生物涂料以及制备方法和应用。

背景技术

种植体治疗是目前临床上骨缺损和牙缺失治疗的常见手段。然而，种植体作为异物，常引起周围炎症，严重影响种植体的治疗效果。如何增强种植体的组织相容性，减轻炎症，至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供种植体周围抗炎用融合基因、外泌体、生物涂料以及制备方法和应用。基于本发明所述融合基因制备得到的抗炎外泌体负载于种植体上后，能够提高种植体的生物相容性，具有显著的抗炎作用。

本发明提供了种植体周围抗炎用融合基因，所述融合基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本发明还提供了基于上述技术方案所述融合基因的表达载体，所述表达载体含上述技术方案所述融合基因。

优选的是，所述表达载体的构建用骨架质粒包括pUC57载体或pWPI载体。

本发明还提供了一种抗炎外泌体，所述抗炎外泌体能够表达上述技术方案所述融合基因。

本发明还提供了上述技术方案所述抗炎外泌体的构建方法，包括以下步骤：

a)将上述技术方案所述融合基因克隆至pUC57载体，得到pUC57-IL10；

b)将步骤a)所述pUC57-IL10和pWPI载体酶切，连接，得到pWPI-IL10；

c)将步骤b)得到的pWPI-IL10转化入Stbl3大肠杆菌，提取pWPI-IL10；

d)将步骤c)得到的pWPI-IL10和psPAX2、pMD2G转染包装细胞HEK293细胞，得到过表达IL10的病毒载体；

e)将步骤d)得到的过表达IL10的病毒载体感染MSC细胞，培养、分离得到抗炎外泌体。

本发明还提供了一种基于上述技术方案所述抗炎外泌体的抗炎生物涂料，所述生物涂料包括PEI溶液、明胶溶液和抗炎外泌体溶液。

优选的是，所述PEI溶液中PEI的质量浓度为0.5～2mg/ml，所述PEI溶液的溶剂为0.15M的氯化钠水溶液；所述明胶溶液中明胶的质量浓度为5mg/ml，所述明胶溶液的溶剂为含有0.15M氯化钠的PBS水溶液；以蛋白质量浓度计，所述抗炎外泌体溶液中抗炎外泌体的质量浓度为100μg/ml，所述抗炎外泌体溶液的溶剂为壳聚糖溶液；所述壳聚糖溶液中壳聚糖的质量浓度为5mg/ml，所述壳聚糖溶液的溶剂为含0.15M氯化钠的体积百分含量为1％的醋酸水溶液。

本发明还提供了基于上述技术方案所述生物涂料的种植体的改造方法，包括以下步骤：

1)将种植体进行酸蚀，得到酸蚀后的种植体；

2)将步骤1)酸蚀后的种植体在PEI溶液中浸泡20～30min，清洗，得到吸附PEI分子的种植体；

3)将步骤2)得到的吸附PEI分子的种植体在明胶溶液中浸泡10～15min，清洗，得到负载明胶的种植体；

4)将步骤3)得到的负载明胶的种植体在抗炎外泌体溶液中浸泡10～15min，清洗，得到负载抗炎外泌体的种植体；

5)重复步骤3)和步骤4)3～5次，得到改造后的种植体。

本发明还提供了一种基于上述技术方案所述改造方法制备得到的抗炎种植体。