[发明专利]一种那屈肝素钙二糖谱的检测方法在审
| 申请号： | 202010177288.5 | 申请日： | 2020-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN111239321A | 公开（公告）日： | 2020-06-05 |
| 发明（设计）人： | 白淑敏;吕晓利;任立新;宋梦薇;滕宁宁;齐硕 | 申请（专利权）人： | 北京赛升药业股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/96 | 分类号： | G01N30/96 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 陈征 |
| 地址： | 100176 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肝素 钙二糖谱 检测 方法 | ||
1.一种那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，包括：先向样品溶液中加入混合肝素酶进行酶解完全，再采用阴离子交换色谱法对酶解产物进行检测。
2.根据权利要求1所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，所述混合肝素酶由肝素酶Ι、肝素酶Π与肝素酶Ш等量混合。
3.根据权利要求1或2所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，所述混合肝素酶的加入量为0.15-0.25IU/mg那屈肝素钙，优选0.2IU/mg那屈肝素钙。
4.根据权利要求1-3任一所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，所述酶解完全的温度为25-27℃。
5.根据权利要求1-4任一所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，所述酶解的时间70-75h，优选72h。
6.根据权利要求1-5任一所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，所述酶解完全的判断标准为：
(1)表征值：那屈肝素钙的特征峰与保留时间为25min的未知峰的峰面积比；
(2)酶解完全的判定标准为：表征值趋于稳定时即为酶解完全。
7.根据权利要求1-6任一所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述阴离子交换色谱法的色谱条件如下：
阴离子交换色谱柱：以强离子交换树脂为填充剂；
流动相A：将磷酸二氢钠固体溶解于蒸馏水，用磷酸调pH至3.0，制得磷酸二氢钠浓度为2.0mM的流动相A；
流动相B：将高氯酸钠溶解于流动相A中，用磷酸调pH至3.0，制得高氯酸钠浓度为1.0M的流动相B。
8.根据权利要求7所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，所述阴离子交换色谱法的洗脱时间为90min，且梯度中的平衡时间不得小于30min。
9.根据权利要求8所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，所述洗脱程序如下：
10.根据权利要求8所述的那屈肝素钙二糖谱的检测方法，其特征在于，所述阴离子交换色谱法的色谱条件还包括：
洗脱温度：35℃～45℃，优选40℃；
流速：0.45ml/min～0.8ml/min；
色谱柱的内径：3mm以上，优选4.6mm。
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