[发明专利]一种用于谷胱甘肽合成的重组大肠杆菌及其应用有效
| 申请号： | 202010177473.4 | 申请日： | 2020-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN113388559B | 公开（公告）日： | 2022-11-15 |
| 发明（设计）人： | 李志敏;崔向伟 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海三和万国知识产权代理事务所(普通合伙) 31230 | 代理人： | 任艳霞 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 谷胱甘肽 合成 重组 大肠杆菌 及其 应用 | ||
1.一种用于谷胱甘肽合成的重组大肠杆菌，其特征在于，在双功能谷胱甘肽合成酶GshF的N端和多聚磷酸激酶PPK的C端分别连接SpyCatcher和SpyTag，将修饰过的两个基因片段同时整合到同一个质粒载体上，转化获得重组大肠杆菌，所述SpyCatcher通过柔性linker连在GshF的N端，所述SpyTag通过柔性linker连在PPK的C端，所述柔性linker序列如SEQ ID NO.17所示。
2.权利要求1所述用于谷胱甘肽合成的重组大肠杆菌在合成谷胱甘肽中的应用。
3.一种利用重组大肠杆菌合成谷胱甘肽的方法，其特征在于，利用权利要求1所述重组大肠杆菌，在温度为30-45℃，pH为6.5-8.0的条件下催化合成谷胱甘肽。
4.根据权利要求3所述的一种利用重组大肠杆菌合成谷胱甘肽的方法，其特征在于，催化反应的底物为L-谷氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐、甘氨酸、六偏磷酸钠、ADP 和镁离子盐。
5.根据权利要求4所述的一种利用重组大肠杆菌合成谷胱甘肽的方法，其特征在于，催化反应的底物浓度为L-谷氨酸 20-120mM、L-半胱氨酸盐酸盐20-120mM、甘氨酸20-120mM、六偏磷酸钠 20-100mM、ADP 1-3mM、镁离子盐20-100mM。
6.根据权利要求3所述的一种利用重组大肠杆菌合成谷胱甘肽的方法，其特征在于，利用重组大肠杆菌的全细胞或者粗酶液进行催化反应，反应结束后通过离心或膜过滤的方式回收细胞或多酶复合物重复利用。
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