[发明专利]用于检测尿液中微量触珠蛋白的化学发光试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测尿液中微量触珠蛋白的化学发光试剂盒，其特征在于：所述化学发光试剂盒采用双单抗夹心法检测尿液中的微量触珠蛋白，所述化学发光试剂盒包括化学发光板、酶标单抗溶液、标准品溶液和发光底物，所述化学发光板采用稀释后的单克隆抗体5C4包被，并采用封闭液封闭，所述酶标单抗溶液包括单克隆抗体1A2和抗体稀释液，所述单克隆抗体5C4和单克隆抗体1A2为可识别人类天然Hp分子结构表位的单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的用于检测尿液中微量触珠蛋白的化学发光试剂盒，其特征在于：所述单克隆抗体5C4为IgG2aλ型抗体；所述单克隆抗体1A2为IgG1κ型抗体。

3.根据权利要求2所述的用于检测尿液中微量触珠蛋白的化学发光试剂盒，其特征在于：所述化学发光板的制备过程包括包被、封闭和干燥密封，具体步骤为：采用50mM、pH＝9.6的碳酸盐缓冲液作为包被液，将单克隆抗体5C4稀释至3μg/mL，化学发光板的每个微孔中加入100μL稀释后的单克隆抗体5C4，37℃静置4h；封闭液为包含1.2％BSA、0.1％酪蛋白及0.1％Proclin300的20mM pH＝7.4的PBS缓冲液，包被后的化学发光板经洗涤后，每孔加入封闭液120μL，37℃静置2h；封闭后的发光板加干燥剂密封处理，即得到包被的化学发光板。

4.根据权利要求3所述的用于检测尿液中微量触珠蛋白的化学发光试剂盒，其特征在于：所述酶标单抗溶液中单克隆抗体1A2和抗体稀释液的稀释比例为1:3000，所述抗体稀释液为20mM、pH＝7.4的PBS缓冲液，其包括3％的BSA、0.8％氯化钠、0.01％氯化钾及0.1％Proclin300。

5.根据权利要求4所述的用于检测尿液中微量触珠蛋白的化学发光试剂盒，其特征在于：所述标准品溶液由已知浓度可溯源的Hp蛋白经过标准品稀释液稀释而成，所述标准品稀释液为20mM、pH＝7.4的PBS缓冲液，包括1％BSA、0.8％氯化钠、2％新生牛血清和0.1％Proclin300。

6.根据权利要求5所述的用于检测尿液中微量触珠蛋白的化学发光试剂盒，其特征在于：所述发光底物由A液和B液按体积比1:1混合制成，所述A液制备过程为：称取BSA 6mg和甘氨酸14mg，溶解于200mL，pH＝8.5，0.1M Tris-HCl溶液中，加入0.02M的鲁米诺溶液10mL，0.1M过碘酚1mL；溶解后混匀4℃避光保存；

所述B液制备过程为：称取过氧化脲48mg，溶解于200mL，pH＝8.5，0.1M Tris-HCl溶液中，加入Triton X-100 0.5mL；溶解后混匀，4℃避光保存。

7.一种尿液中微量触珠蛋白的检测方法，其特征在于：利用如权利要求1至6任一项所述的化学发光试剂盒检测尿液中微量触珠蛋白，所述检测方法为双单抗夹心法，包括如下步骤：向利用稀释后的单克隆抗体5C4包被后的化学发光板每孔加入待测样本或者标准品溶液25μL，再向微孔中加入100μL的制备好的酶标单抗溶液，混匀，37℃温育60min，用PBST洗板五次，按体积比为1:1分别加入的发光底物A液和B液，避光反应3分钟后上机测定发光值；根据测定的发光值与Hp含量标准曲线，计算得到Hp的含量。