[发明专利]一种贝类中亲脂性毒素的高分辨质谱检测方法

说明书

本发明属于质谱检测技术领域，公开了一种贝类中亲脂性毒素的高分辨质谱检测方法。所述方法包括样品处理、定性定量检测，其中，所述样品处理方法为：称取样品于离心管中，加入甲醇，涡旋混匀，超声提取，离心，取上清液转移至另一离心管中；残渣再用甲醇重复提取1次，合并上清液用甲醇定容，加入无水硫酸镁、C18，剧烈震荡后离心，上清液经滤膜过滤；所述定性定量检测是样品处理完后用液相色谱‑四极杆‑静电轨道阱高分辨质谱进行测定。该方法可同时对多种亲脂性贝类毒素进行定性定量，对了解贝类毒素污染情况有重要参考意义。

技术领域

本发明涉及质谱检测技术领域，具体是涉及一种贝类中亲脂性毒素的高分辨质谱检测方法。

背景技术

近年来，贝类养殖快速发展，是我国沿海主要养殖的优势品种。工业废水和生活污水进入江河湖海，导致水体的富营养化，使得水体中藻类大量繁殖，许多海洋赤潮藻类可产生毒素，而贝类是滤食性动物，以浮游植物和有机碎屑为食，产毒藻经过贝类的蓄积作用进入食物链，被消费者食用后可危害人体内的消化系统、神经系统、心血管系统，导致人体中毒，甚至死亡，给消费者带来极大的食用安全风险。

在现有贝类毒素中，大田软海绵酸类毒素Okadaic Acid、蛤毒素Pectenotoxin、虾夷扇贝毒素Yessotoxin、原多甲藻酸毒素Azaspir acid、环亚胺类毒素Cyclic Imines均为亲脂性聚醚类物质，这类毒素毒性强、残留高且代谢慢，因此成为欧盟、美国、加拿大等组织和国家重点关注的对象。亲脂性贝毒的主要成分在中国均已被发现，这不仅使得中国贝类消费存在巨大的潜在风险，还使外贸出口面临新的技术和贸易壁垒。

液相色谱-质谱联用技术是分析贝类毒素的高效手段，避免了生物法的假阴性。然而，现有技术中极少可一次性检测多种亲脂性海洋生物毒素的方法，因此，有必要通过色谱柱的合理选择以及流动相等质谱参数的优化，建立可一次性完成贝类亲脂性海洋生物毒素高通量检测的液质联用方法。

发明内容

本发明为了克服上述背景技术的不足，提供了一种贝类中亲脂性毒素的高分辨质谱检测方法，该方法可同时对多种亲脂性贝类毒素进行定性定量，对了解贝类毒素污染情况有重要参考意义。

为达到本发明的目的，本发明贝类中亲脂性毒素的高分辨质谱检测方法包括样品处理、定性定量检测，其中，所述样品处理方法为：称取样品于离心管中，加入甲醇，涡旋混匀，超声提取，离心，取上清液转移至另一离心管中；残渣再用甲醇重复提取1次，合并上清液用甲醇定容，加入无水硫酸镁、C18，剧烈震荡后离心，上清液经滤膜过滤；所述定性定量检测是样品处理完后用液相色谱-四极杆-静电轨道阱高分辨质谱进行测定。

优选地，所述样品处理方法为：准确称取5.00g(±0.01g)样品于50mL离心管中，加入10mL甲醇，涡旋混匀1min，超声提取5min，8000rpm离心10min，取上清液转移至另一离心管中；残渣再用10mL甲醇重复提取1次，合并上清液用甲醇定容到20mL；加入1g无水硫酸镁、0.15g C18，剧烈震荡1min，8000rpm离心5min；上清液经经0.22μm滤膜过滤。

进一步地，所述贝类中亲脂性毒素包括大田软海绵酸OA、鳍藻毒素DTX1、鳍藻毒素DTX2、蛤毒素PTX2、原多甲藻酸类毒素AZA1、原多甲藻酸类毒素AZA2、原多甲藻酸类毒素AZA3、虾夷扇贝毒素YTXs、米氏裸甲藻毒素GYM、螺环内酯毒素SPX1。

进一步地，所述定性定量检测中液相色谱条件如下：

色谱柱：C18，规格为1.9μm，2.1mm×100mm；

流动相：A-乙腈；B-0.002mol/L甲酸铵溶液，含0.2％甲酸；

柱温：40℃；

进样量：5μL；

梯度洗脱程序如下：