[发明专利]筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法有效
| 申请号： | 202010178953.2 | 申请日： | 2020-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN111323602B | 公开（公告）日： | 2021-09-14 |
| 发明（设计）人： | 储岳峰;吴娅琴;颜新敏;郝华芳;陈胜利;马丽娜;刘永生 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543 |
| 代理公司： | 青岛致嘉知识产权代理事务所(普通合伙) 37236 | 代理人： | 王巧丽 |
| 地址： | 730046 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 筛选 绵羊 肺炎 支原体 山羊 血清学 阴性 ielisa 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于改良泰亚氏肉汤培养基中扩培后，菌液离心、灭菌、PBS超声重悬，分离得到抗原；
（2）用所述抗原包被酶标板，每孔100μl，37℃温箱1h后4℃过夜；弃去包被液并用洗涤液洗涤，每孔加100μl封闭液，37℃封闭2h；加入100μl 200倍稀释的血清样品，37℃孵育1h；用PBST洗板后，每孔加入100μl用5%脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗，37℃孵育1h；
（3）孵育后用PBST洗板，然后每孔加入100μl TMB显色，37℃孵育10min；再加入终止液终止反应；将反应后的酶标板置于酶标仪上读取OD450 nm值。
2.如权利要求1所述的筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，其特征在于，所述抗原包被量为60 ng/孔。
3.如权利要求1所述的筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，其特征在于，所述封闭液为5%脱脂奶粉。
4.一种山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株分离得到的抗原在筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种两种病原血清学阴性羊中的应用。
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