[发明专利]胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括：R1试剂：包被链霉亲和素的磁珠溶液；R2试剂：吖啶酯标记的IGFBP-3抗体溶液；R3试剂：生物素标记的IGFBP-3抗体溶液。

2.根据权利要求1所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的R1试剂中，磁珠为粒径大小1.5-3μm的Fe3O4纳米粒子，包被链霉亲和素的磁珠浓度为0.05％-0.15％。

3.根据权利要求1所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的R2试剂，pH为5.0-8.0，吖啶酯标记的IGFBP-3浓度为0.3μg/mL-1.5μg/mL，抗体与吖啶酯按摩尔体积比为1:2.5-1:15。

4.根据权利要求1或3所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的吖啶酯采用DMAE类吖啶酯或酰胺类吖啶酯。

5.根据权利要求4所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒，其特征在于，DMAE类吖啶酯采用DMAE-NHS、NSP-DMAE-NHS或NSP-DMAE-HEG-Glu-NHS。

6.根据权利要求4所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒，其特征在于，酰胺类吖啶酯采用NSP-SA-NHS。

7.根据权利要求1所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述的R3试剂，pH为5.0-8.0，生物素标记的IGFBP-3抗体浓度为0.4μg/mL-2.5μg/mL，抗体与生物素按摩尔体积比为1:3.5-1:20。

8.根据权利要求1所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒，其特征在于，还包括以缓冲液为基质的IGFBP-3蛋白配制校准品及质控品。

9.根据权利要求1所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

R1试剂的制备：使用100-400mM Tris-HCl缓冲液配制包被链霉亲和素的磁珠浓度为0.05％-0.15％；

R2试剂的制备：使用30KDa孔径超滤离心管将IGFBP-3抗体缓冲液置换为100mM-200mMPB缓冲液，将抗体与吖啶酯按摩尔体积比1:2.5-1:15混合，充分混匀，室温放置1-3h后，AKTA蛋白纯化仪纯化标记抗体，将收集到的吖啶酯标记抗体选用pH5.0-8.0的100-400mMTris-HCl缓冲液稀释至0.3μg/mL-1.5μg/mL；

R3试剂的制备：使用30KDa孔径超滤离心管将IGFBP-3抗体缓冲液置换为100mM-200mMPB缓冲液，将抗体与生物素按摩尔体积比1:3.5-1:20混合，充分混匀，室温放置2-4小时后，AKTA蛋白纯化仪纯化标记抗体，将收集到的生物素标记抗体选用pH5.0-8.0、100-400mMTris-HCl缓冲液稀释至0.4μg/mL-2.5μg/mL。

10.根据权利要求1所述的胰岛素样生长因子结合蛋白-3化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，还包括制备校准品及质控品的步骤，校准品的制备步骤为：用含有0.5-1.0％BSA、2-3％海藻糖、0.1-0.5％PEG6000、0.05-0.1％吐温-20及0.1-0.5％的酪蛋白酸钠、pH7.0-8.0的100-400mM MES缓冲液并添加0.1％叠氮钠防腐剂，将IGFBP-3蛋白稀释成校准品，分装成0μg/mL、0.75μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL；质控品的制备步骤为：用含有0.5-1.0％BSA、0.1-0.5％PEG6000、0.05-0.1％吐温-20及0.1-0.5％的酪蛋白酸钠，pH7.0-8.0的100-400mM MES缓冲液将IGFBP-3蛋白配制成浓度为1μg/mL和8μg/mL的质控品。