[发明专利]一种利用小分子抑制剂SP600125制备染色体标本的方法

权利要求书

1.一种利用小分子抑制剂SP600125制备染色体标本的方法，其特征在于，采用SP600125对鱼类或哺乳动物的离体培养细胞进行处理，结合低渗、固定以及制片染色后，即得到染色体标本；

采用SP600125对鱼类或哺乳动物的离体培养细胞进行处理的具体操作包括如下步骤：将离体培养细胞接种于含细胞培养液的培养皿中，置于恒温箱中传代培养24-36 h后，在所述细胞培养液中加入SP600125至终浓度为50-150µM，暗处理培养22-28 h后，加入质量浓度为0.20-0.25%的胰酶进行细胞脱壁处理，用细胞培养液终止消化后将细胞轻轻吹打成单细胞悬液，离心，弃上清后获得细胞沉淀；所述恒温箱中的培养温度为28-37℃；所述SP600125在使用前先用二甲基亚砜作为溶剂，配至浓度为20 mM；所述离心的转速为1000-1500r/min，离心时间为5-10min；

所述低渗的具体操作包括如下步骤：在经过所述SP600125处理后得到的细胞沉淀中加入浓度为0.0375-0.075mol/L的KCl溶液，用吸管轻轻吹打成单细胞悬液，处理40-60min后加入卡诺氏固定液进行预固定，所述卡诺氏固定液由甲醇和冰醋酸按3:1体积比配制得到，然后轻轻吹打均匀，离心，弃上清后获得低渗处理细胞沉淀；

所述固定的具体操作，包括如下步骤：在所述低渗处理后得到的低渗处理细胞沉淀中加入卡诺氏固定液，轻轻吹打成单细胞悬液后在4℃条件下固定30 min以上，离心，弃上清，保留细胞沉淀，以上固定步骤重复1-4遍，最后加入卡诺氏固定液，吹打细胞沉淀制成细胞悬液；所述离心的转速为1000-1500r/min，离心时间为5-15min；

所述制片染色的具体操作，包括如下步骤：吸取所述固定后得到的细胞悬液悬滴于玻片上，自然干燥，用pH为6.8-7.0的PBS将吉姆萨母液按9:1体积比稀释后，对玻片上的细胞进行染色，30-45min后吸去染液，用水洗后自然干燥，即得到所述的染色体标本。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述KCl溶液在加入所述细胞沉淀中之前，先提前在28-37℃的条件下提前预热；所述离心的转速为1000-1500r/min，离心时间为5-10min。

3.一种利用小分子抑制剂SP600125制备染色体标本的方法，其特征在于，采用SP600125对鱼类活体组织进行处理，结合低渗、固定以及制片染色后，即得到染色体标本；

采用SP600125对鱼类活体组织进行处理的具体操作包括如下步骤：对目标鱼按2-2.5μL/g鱼体重的剂量注射植物血球凝集素，12-15h后按3-4μL/g鱼体重的剂量再次注射植物血球凝集素，3-5h后注射植物血球凝集素和SP600125，其中植物血球凝集素按1.2-1.5μL/g鱼体重的剂量注射，SP600125按0.8-1μL/g鱼体重的注射；三次注射结束1.5-2 h后，解剖取肾脏组织，将经生理盐水清洗后的肾脏组织剪碎，加入生理盐水并用吸管反复吹打，静置5-10min后取上层细胞悬液进行离心；离心后弃上清，留细胞沉淀；注射部位为鱼的胸鳍基部无鳞片凹陷处；所述植物血球凝集素的浓度为4-5mg/mL；所述SP600125的浓度为3mM-8mM；所述生理盐水为质量浓度为0.8-0.9%的氯化钠溶液；

所述低渗的具体操作包括如下步骤：在经过所述SP600125处理后得到的细胞沉淀中加入浓度为0.0375-0.075mol/L的KCl溶液，用吸管轻轻吹打成单细胞悬液，将出现的絮状沉淀吸出丢弃；处理1-2h后进行离心；离心后，弃上清，获得低渗处理细胞沉淀；所述离心的转速为1000-1500r/min，离心时间为5-15min；

所述固定的具体操作，包括如下步骤：在所述低渗处理后得到的低渗处理细胞沉淀中加入卡诺氏固定液，轻轻吹打成单细胞悬液后在4℃条件下固定30 min以上，离心，弃上清，保留细胞沉淀，以上固定步骤重复1-4遍，最后加入卡诺氏固定液，吹打细胞沉淀制成细胞悬液；所述离心的转速为1000-1500r/min，离心时间为5-15min；

所述制片染色的具体操作，包括如下步骤：吸取所述固定后得到的细胞悬液悬滴于玻片上，自然干燥，用pH为6.8-7.0的PBS将吉姆萨母液按9:1体积比稀释后，对玻片上的细胞进行染色，30-45min后吸去染液，用水洗后自然干燥，即得到所述的染色体标本。