[发明专利]一种基于LC-MS高通量高灵敏度检测植物激素的方法

说明书

本发明提供一种基于LC‑MS高通量高灵敏度检测植物激素的方法，其以12种同位素植物激素作为内标物，进行反相色谱将植物激素分离后，再采用内标标准曲线法进行串联质谱(LC‑MS/MS)分析，12种同位素植物激素包括D‑tZ、D‑tZR、D‑iPR、D‑iP、D‑BL、D‑ABA、D‑SA、D‑ACC、D‑DHZ、D‑GA1、D‑GA4和D‑CS，质谱分析采用电喷雾电离正负离子(ESI+、ESI‑)同时扫描检测模式和多反应监测(MRM)的扫描模式，本发明提供的检测方法具有通量高、灵敏度高、选择性好、分析时间短等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术检测领域，具体涉及一种基于LC-MS高通量高灵敏度检测植物激素的方法。

背景技术

植物激素(plant hormone)亦称为植物天然激素或植物内源激素，是植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节(促进、抑制)植物生理过程的有机化合物。在细胞分裂与生长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养方面，分别或相互协调的调控植物的生长发育与分化。

已知植物体内产生的激素有六大类，即生长素(auxins)、赤霉素(cytokinins，CTKs)、细胞分裂素(gibberellins，GAs)、脱落酸(abscisic acid，ABA)、乙烯(ethylene，ETH)和油菜素甾醇(brassnosteroids，BRs)。这些物质虽然在植物体内含量极微，但作用却很大，是植物生命活动不可缺少的物质，对于调节植物的各种生长发育过程和环境的应答具有十分重要的意义。

植物激素多数不含高灵敏度的检测基团，加之基质复杂，信噪比难以提升；另外，内源性植物激素的浓度分布可宽达5～6个数量级，如生长素、SA、JA等含量在1～100ng/gFW(鲜重)之间，而GAs等低于0.1ng/g FW，BRs等甚至低于1pg/g FW，这要求测定方法不仅有很高的灵敏度，还要有宽广的动态测定范围。目前大多数基于液相色谱-质谱联用(LC-MS)的方法只能同时测定植物激素中的一种或几种，通量有限且灵敏度不高，难以推广应用，亟待一种基于LC-MS高通量高灵敏度检测植物激素的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于LC-MS高通量高灵敏度检测植物激素的方法，向植物组织样品中加入同位素植物激素作为内标物，通过反相色谱将植物激素分离后，采用内标标准曲线法进行串联质谱(LC-MS/MS)分析。具有通量高、灵敏度高、选择性好、分析时间短等优点。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

为了方便撰写和阅读，本专利申请中的激素名称采用了英文简称，所有激素的中英文对照及英文缩写如下：

一种基于LC-MS高通量高灵敏度检测植物激素的方法，包括如下步骤：

步骤S1：配制同位素内标品植物激素混合溶液，分别称取各种同位素内标品植物激素，包括D-tZ、D-tZR、D-iPR、D-iP、D-BL、D-ABA、D-SA、D-ACC、D-DHZ、D-GA1、D-GA4和D-CS，分别加入甲醇溶液溶解制成质量浓度相同的12种同位素内标品植物激素母液，取相同体积的各种同位素内标品植物激素母液混合均匀，并用50％的甲醇水溶液稀释，制成200ng/mL的同位素内标品植物激素混合溶液，备用；

步骤S2：配制标准品植物激素溶液，分别称取标准品植物激素，再分别加入甲醇溶液溶解制成质量浓度相同的标准品植物激素母液，取相同体积的各种标准品植物激素母液混合均匀，并用50％的甲醇水溶液稀释，制成1000ng/mL的标准品植物激素溶液，备用；