[发明专利]一种用于表达RP11-395G23.3的序列及其构建体和构建方法与应用

说明书

本发明提供了一种表达RP11‑395G23.3的序列，该序列为SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了一种构建体，该构建体包括质粒载体EcoRI和BamHI限制性上下游酶切位点之间的如SEQ ID NO.1所示DNA序列，构建体序列为SEQ ID NO.2所示。此外本发明还提供了该构建体的制备方法：A、目的基因片段的获得；B、线性化表达载体的制备；C、目的基因构建入线性化表达载体中；D、DH5α感受态细胞的制备和转化；E、菌落PCR鉴定阳性转化子；F、阳性克隆送测序。以及该构建体在抑制子宫内膜癌细胞中的应用。本发明的用于表达RP11‑395G23.3的序列及其构建体能够有效下调子宫内膜癌细胞的存活、迁移和侵袭能力，具有抑制子宫内膜癌细胞的作用。

技术领域

本发明涉及生物学和基因工程的技术领域，具体说是一种用于表达RP11-395G23.3的序列及其构建体和构建方法与应用。

背景技术

子宫内膜癌是一组子宫内膜上皮源型的恶性肿瘤，是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，占女性生殖道恶性肿瘤的20％～30％，近年来在全世界范围内，子宫内膜癌的发病率有所上升且有年轻化的趋势。在我国，子宫内膜癌的发病率仅次于宫颈癌，居第二位，而在欧美等发达国家，其发病率高居女性生殖道恶性肿瘤的首位。目前子宫内膜癌的发病机制尚不明确，多认为发病与高雌激素刺激和无孕激素拮抗有关。根据病因、组织学及生物学特性的不同，子宫内膜癌可分为以下两个亚类：I型子宫内膜癌为雌激素依赖型，是临床最常见的类型，占子宫内膜癌的80％-90％。其组织类型多为子宫内膜腺癌(75％-80％)，II型子宫内膜癌为非雌激素依赖型，占子宫内膜癌患者的10％-15％，其组织类型多为浆液性乳头状腺癌，少部分为透明细胞癌，细胞分化较差，恶性度高。子宫内膜癌首选手术治疗，在手术病例分期的基础上，辅助以放、化疗和激素治疗，但治疗效果并不理想。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于表达RP11-395G23.3的序列及其构建体和构建方法与应用。

本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是:

本发明的用于表达RP11-395G23.3的序列，该序列为SEQ ID NO.1所示。

本发明的构建体，包括质粒载体EcoRI和BamHI限制性上下游酶切位点之间的如SEQ ID NO.1所示DNA序列，构建体序列为SEQ ID NO.2所示。

RP11-395G23.3的过表达质粒为：

pLenti-EF1a-EGFP-F2A-Puro-CMV-LncRNA(RP11-395G23.3)。

所述的质粒载体为H145。

本发明的构建体的构建方法，包括：

A、目的基因片段的获得，通过PCR进行扩增方式或通过酶切方式得到目的基因；

其中通过PCR进行扩增得到目的基因的方式中，使用高保真的PrimeSTAR酶扩增目的基因，反应体系和条件如下：

按下列组分配制PCR反应液：

PCR反应条件设置如下：

①3 Step法

②2 Step法

PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测扩增效果，并把目的基因条带从琼脂糖凝胶电泳后的胶中割下来，用TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.3.0做胶回收；

通过酶切得到目的基因的方式中：