[发明专利]针对病原体抗原的抗体矩阵检测法（MEGA法）及多联检测卡

说明书

本发明公开了针对病原体抗原的抗体矩阵检测法(MEGA法)及多联检测卡。本发明提供了一种检测或辅助检测被检样品针对病原体抗原的抗体多联检测卡，其由n个不同探测抗体的检测试纸条并联组成；每个所述检测试纸条延所述被检样品流动方向包括样品垫、喷有探测抗体的结合垫、含有m个检测线和质控线的NC膜和吸水纸；m大于等于1。本发明的MEGA法及其多联检测卡可同时检测受试者针对病原体的多种抗原产生的不同种类和亚类的抗体，所得数据能够更准确的反映受感染和保护的情况。MEGA法及其多联检测卡既可以用于血清检测，也可以用于其他体液特别是粘膜液体的无创检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种针对病原体抗原的抗体矩阵检测法(MEGA法)及多联检测卡。

背景技术

在传染病爆发的过程中，有效的快速检测对于患者的隔离，疾病的管控有极其重要的意义。在快速检测的各种手段中，基于免疫学原理的侧向层析技术是一种常用的方法。

在各种疾病中，呼吸道感染疾病是尤为重大的公共卫生问题。呼吸道感染主要由病毒，细菌，支原体，衣原体引起，侵染鼻腔，咽，喉等上呼吸道器官，以及气管，支气管，肺等下呼吸道器官。主要的病原体包括鼻病毒，冠状病毒,流感病毒，腺病毒，肺炎链球菌，流感嗜血杆菌，肺炎衣原菌，肺炎分枝杆菌等。由于各种病原体在初期引起的症状相似，对于致病因素的区分十分必要，尤其在大流行传染病爆发的时候,迅速鉴别出致病病原体对于疾病和患者的相应管理有重要的意义。准确的快速检测在紧急情况发生时有极大的需求，而且世界各国都普遍存在短缺的现象，这一点在COVID-19流行的发生发展的过程中体现的尤为明显。

机体感染病原体后获得性免疫系统会产生相应的特异性抗体，其中IgM抗体在感染后最先产生，是初次感染的标志性抗体。随着感染的延长或者再次感染，抗体会发生类别转换，血液中IgG水平升高，粘膜免疫相关的IgA水平也会升高。检测血液和粘膜中的特异性IgG和IgA水平对于患者是否受到感染以及感染后是否产生了保护性抗体是非常重要的指示。另一个被相对忽视的抗体类别是IgE,它对病原体的清除和过敏反应的启动都具有功效。

免疫侧向层析试纸是现有最方便的快速检测技术之一。试纸由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸、塑料基底板等几部分组成(见图1)，结合垫上含可以和靶标物质结合的探测抗原或探测抗体，NC膜上含能与靶标物质结合的抗体或抗原。显色反应有若干种，主要包括胶体金，荧光和量子点，其中，胶体金是一种人眼可见的显色方式，而荧光和量子点需要一定的光学装置。

为了区分鉴定何种病原体侵染宿主，可以将层析试纸分为两种。一种是直接法，即检测受试者是否携带该病原体。另一种是间接法，即检测受试者是否产生了针对该病原体的抗体，由此判断其感染史。直接法和间接法检测各有优势与劣势，直接法给出病原体存在的直接证明，但是该方法依赖于所取的病原体的浓度，如果取样部位不对，该处不存在病原体，或者虽然所取样品中有病原体，但是其浓度低于检测灵敏度，就会给出假阴性结果。间接法检测的是针对病原体的特异性抗体。受病原体感染后，绝大多数具有正常适应性免疫系统的人都会产生针对病原体抗原的特异性抗体，检测特异性抗体来反映感染情况以及受试者的免疫系统状态，和直接法相比检测敏感性高。间接法的不足之处是病原体感染后，要经过几天时间才产生特异性抗体，和直接法相比会有一定的滞后。由于抗体在病原体清除后仍然能够在一段时间内维持较高水平，间接法得到的阳性结果只能表明被检人被该病原体感染过，但是并不能表明检测时该病原体是否还存在于被检人体内。另外抗原也有可能被非特异性抗体吸附，造成假阳性情况，因此需在建立方法的时候排除产生假阳性的条件。

人的抗体根据重链Fc段的区别一共可以分为5种类别即IgM,IgD,IgA,IgE，IgG。IgA和IgG还有亚类，即IgA1，IgA2，IgG1,IgG2,IgG3,IgG4。检测血液和粘膜中的多种特异性抗体的水平可以总观受试者是否受到感染以及感染后是否产生了保护性抗体，对患者的病程进展可以提供重要信息。