[发明专利]一种快速测定珠芽蓼中绿原酸同分异构体的方法及应用

权利要求书

1.一种快速测定珠芽蓼中绿原酸同分异构体的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：采用50％甲醇提取珠芽蓼制备供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：

绿原酸对照品溶液：取绿原酸加甲醇制成绿原酸对照品溶液；

新绿原酸对照品溶液：取新绿原酸加甲醇制成新绿原酸对照品溶液；

隐绿原酸对照品溶液：取隐绿原酸加甲醇制成隐绿原酸对照品溶液；

混合对照品溶液：取绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸的对照品加甲醇制成绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸的混合对照品溶液；

(3)将步骤(1)中的供试品溶液和步骤(2)中的对照品溶液按照以下高效液相色谱分析检测条件进行检测分析：C18色谱柱，流动相0.1％乙酸(A)-甲醇(B)，梯度洗脱，流速0.8～1.5mL/min；柱温25～35℃；检测波长330nm。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备步骤包括：采用50％甲醇超声或涡旋提取珠芽蓼，离心，取上清液过滤即得供试品溶液。

3.根据权利要求1～2任一项所述的测定方法，其特征在于，所述珠芽蓼与所述50％甲醇的料液比为1:10～1:50g/mL，优选1:30g/mL。

4.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述超声的时间为1～45min，优选1～5min，更优选5min；

所述涡旋的时间为1～5min，优选3～5min，更优选5min。

5.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述离心时间为3-10min，优选5min；所述离心转速为3000-8000rpm/min，优选5000rpm/min。

6.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备步骤包括：所述珠芽蓼为珠芽蓼根茎，精密称定过3号筛的珠芽蓼根茎粉末0.25g在7.5mL的50％甲醇中超声或涡旋提取5min，取出放冷，称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，5000rpm/min离心5min，取上清液过0.22μm有机滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。

7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述C18色谱柱为Agilent PoroShell120 EC-C18(50mm×4.6mm，2.7μm)或者Agilent ZORBAX SB-C18(150mm×4.6mm，5μm)，优选Agilent PoroShell 120EC-C18(50mm×4.6mm，2.7μm)。

8.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述C18色谱柱为Agilent PoroShell120 EC-C18(50mm×4.6mm，2.7μm)，流速1mL·min^-1，柱温35℃，梯度洗脱条件如下：

0-12min，B由10％升至11％～15％；或

0-7min，B由10％升至11％～15％，7-12min，B由11％～15％升至100％；

优选0-7min，B由10％升至13％，7-12min，B由13％升至100％。

9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述C18色谱柱为Agilent PoroShell120 EC-C18(50mm×4.6mm，2.7μm)；梯度洗脱条件为：0-7min，B由10％升至13％，7-12min，B由13％升至100％；流速0.8～1.5mL·min^-1；柱温35℃；检测波长330nm；进样量1～2.5μL，优选地，进样量为2μL。

10.权利要求1～9任意一项所述的方法在鉴定珠芽蓼中同分异构体或测定珠芽蓼中同分异构体含量中的应用。