[发明专利]新型爱德华氏菌减毒疫苗株、其制备方法及其应用

权利要求书

1.一种爱德华氏菌减毒株的用途，用于制备诱导爱德华氏菌宿主产生对抗爱德华氏菌的免疫保护力的组合物；所述的减毒株中目标基因或其编码的蛋白被下调，所述的目标基因包括：EseG、EseJ、EseH、ETAE_1586、ETAE_1604、ETAE_2186、ETAE_2188、ETAE_3282、EvpJ和rpoS；所述的减毒株中esrB基因的表达上调；所述爱德华氏菌为杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)；所述爱德华氏菌宿主为鲽形目鲆科的鱼。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的下调包括：敲除或沉默目标基因，或抑制目标基因编码的蛋白的活性。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的下调包括：以同源重组方法敲除目标基因，以基因编辑方法敲除目标基因，以定点突变的方法沉默目标基因，或以特异性干扰基因表达的干扰分子沉默目标基因。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的同源重组方法包括无标记框内缺失突变法。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的同源重组方法包括无标记框内缺失突变法，其中：

以SEQ ID NO: 1～6的引物来靶向缺失ETAE_1586，

以SEQ ID NO: 43～54的引物来靶向缺失EseJ，

以SEQ ID NO: 13～18的引物来靶向缺失EseH，

以SEQ ID NO: 55～60的引物来靶向缺失，EseG，

以SEQ ID NO: 7～12的引物来靶向缺失ETAE_1604，

以SEQ ID NO: 19～24的引物来靶向缺失ETAE_2186，

以SEQ ID NO: 25～30的引物来靶向缺失ETAE_2188，

以SEQ ID NO: 37～42的引物来靶向缺失ETAE_3282，

以SEQ ID NO: 31～36的引物来靶向缺失EvpJ，

以SEQ ID NO: 61～66的引物来靶向缺失rpoS。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，以强启动子驱动所述esrB基因的表达，所述的强启动子包括p_rpsU启动子。

7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的杀鱼爱德华氏菌为EIB202株。

8.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述鲽形目鲆科的鱼为大菱鲆。

9.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物含有所述的爱德华氏菌减毒株和药学上可接受的载体。

10.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物为疫苗组合物。