[发明专利]新型爱德华氏菌减毒疫苗株、其制备方法及其应用

说明书

本发明涉及一种新型爱德华氏菌减毒株，其中目标基因或其编码的蛋白的表达被调控。所述的爱德华氏菌减毒可用作爱德华氏菌病害的预防性药物，对于抑制爱德华氏菌感染具有极其显著的效果。

技术领域

本发明属于免疫学领域，更具体地，本发明涉及一种新型的爱德华氏菌减毒疫苗株、其制备方法及其应用。

背景技术

爱德华氏菌可引起爱德华氏菌病，是一种重要的鱼类病原菌，能对鲶鱼、大菱鲆以及鳗鲡等20多种淡水和海水鱼类致病，引起胃肠炎症和出血性败血症，造成鱼类大量死亡，严重威胁水产养殖业。

随着水产养殖业养殖规模的不断扩大，养殖病害的大规模爆发常常发生。鱼类传染性疾病每年造成的损失占产量的20％以上，大规模爆发的疾病已成为水产养殖行业主要的障碍。造成鱼类传染性疾病的主要原因包括细菌、寄生虫以及病毒。

爱德华氏菌可引起爱德华氏菌病，是一种重要的鱼类病原菌，能对鲶鱼、大菱鲆以及鳗鲡等20多种淡水和海水鱼类致病，引起胃肠炎症和出血性败血症，造成鱼类大量死亡，严重威胁水产养殖业。其中，杀鱼爱德华氏菌是爱德华氏菌属中毒性最强的菌种之一。

目前在海水养殖生产中一般都是通过化学合成的药物或者抗生素来控制该病的大规模爆发，但长期的用药出现很多弊端：1)鱼类疾病有时病因复杂，大量用药存在盲目性，很多疾病目前没有针对性的药物可以治疗；2)化学药物预防作用很弱，生病的鱼摄食很差，无法摄取到有效的药物剂量；3)鱼体摄取的药物往往会残留其中，危害人类健康，且长期用药会带来环境污染，并导致大量微生物抗药性的出现。并且，在长期药物的维持下，大量本该淘汰的抗病能力弱的个体存活下来不仅影响鱼肉的品质，而且会使整个群体抗病能力下降，严重影响海水养殖业的发展。

因此，开发出低毒性或无毒性，环境友好，且效果理想的产品或方法来防治鱼类养殖过程种的病害，是本领域亟待解决的问题。此外，水产养殖业的产业特点要求病害防治技术必须经济、应用实施方便，所以待开发的产品或方法也应满足经济实用的特点。

发明内容

本发明的目的在于提供新型爱德华氏菌减毒疫苗株、其制备方法及其应用。

在本发明的第一方面，提供一种爱德华氏菌减毒株，所述的减毒株中目标基因或其编码的蛋白被下调，所述的目标基因包括：EseG、EseJ、EseH、ETAE_1586、ETAE_1604、ETAE_2186、ETAE_2188、ETAE_3282、EvpJ。

在一个优选例中，所述目标基因还包括：rpoS。

在另一优选例中，还在所述爱德华氏菌减毒株中上调esrB基因的表达。

在另一优选例中，过表达esrB基因使得T3SS及T6SS分泌系统组件过量表达，促进免疫效果，且降低鱼体死亡率，提高免疫保护力。所述的爱德华氏菌减毒株注射鱼体后，较早过量地表达T3SS、T6SS分泌系统组件，但因缺失突变而不表达效应因子，激发宿主免疫反应，形成免疫保护作用，降低其感染爱德华氏菌后死亡率。

在另一优选例中，以强启动子驱动所述esrB基因的表达；较佳地，所述的强启动子包括p_rpsU启动子。

在另一优选例中，所述的下调包括：敲除或沉默目标基因，或抑制目标基因编码的蛋白的活性；较佳地，包括：以同源重组方法敲除目标基因，以基因编辑方法敲除目标基因，以定点突变的方法沉默目标基因，或以特异性干扰基因表达的干扰分子沉默目标基因；较佳地，所述的同源重组方法包括无标记框内缺失突变法，如基于自杀质粒pDMK的无标记框内缺失突变法。

在另一优选例中，所述的爱德华氏菌包括(但不限于)：杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)，迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)，鮰爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)；较佳地，所述的杀鱼爱德华氏菌包括EIB202株。