[发明专利]细菌快速检测方法及试剂

说明书

本发明涉及一种细菌快速检测方法及试剂。首次揭示了一种致病菌高通量快检技术，包括(1)以细菌的16S rRNA或其PCR扩增产物作为测定靶标，设计捕获探针和检测探针；(2)将附着有(1)的捕获探针的微球、检测探针以及经细胞裂解处理的待测样品混合；(3)检测(2)形成的复合物中不同微球的微球识别信号以及可检测标记物，从而确定待测样品中各待测细菌的存在与否以及存在的量。该技术使检测变得更快、更简便、更合理，成本低廉。本发明还优化了可同时检测多种菌株的探针套组，检测效果良好。

本申请是申请号为201510198561.1、申请日为2015年4月21日的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及微生物检测领域，更具体地，本发明涉及基于16S rRNA和液相芯片的细菌高通量快检方法。

背景技术

目前，重大食品安全事件频发，引起人们的高度重视。要从根本上解决食品安全问题，就必须对食品的生产、加工、流通和销售等各环节实施全程管理和监控，这就需要大量能够满足这一要求的快速、方便、准确、灵敏的食品安全分析检测技术。

随着科学技术的发展，食品安全快速分析检测方法在食品卫生检验方面的作用越来越重要。从长远发展来看，免疫学、分子生物学、计算机技术与自动化等学科的发展极大地推动了食品安全分析检测方法向更灵敏更便捷的方向发展，建立高效的食品安全快速分析检测方法，对食品生产、运输、销售过程中的质量控制具有十分重要的意义；同时一旦发生食源性致病微生物中毒事件，也需要在最短时间内完成检测以制定科学合理的治疗方案，赢得治疗时间。这些快速分析检测技术的推广应用，不仅是对传统的食品安全分析检测技术的一个改进和提高，也使食品质量安全有了进一步的保证，从而推动食品工业更加健康、快速地向前发展，不断满足人民提高健康水平的需要。

目前现有的一些食源性致病菌快速检测技术大多是利用免疫学方法，该方法仪器操作简单、检测速度快、灵敏度较高、特异性较好且样品所需量少，但也存在着如致病菌单克隆抗体难以制备、使用多抗易产生交叉反应出现假阳性以及一次只能检测一种或几种致病菌等缺点和不足。因此，目前还需要开发可快速地、高效地检测致病菌的新技术。

发明内容

本发明的目的在于提供基于16S rRNA或其PCR扩增产物和液相芯片的细菌高通量快检方法。

在本发明的第一方面，提供一种细菌快速检测方法，所述方法包括：

(1)以2-20种细菌的16S rRNA或其PCR扩增产物作为测定靶标，设计捕获探针和检测探针；所述的捕获探针是针对每种细菌的16S rRNA或其PCR扩增产物特异性的探针，且其分别附着于2-20种微球上；所述的检测探针是与各细菌的16S rRNA或其PCR扩增产物上共有序列互补的探针，且其包括一可检测标记物；所述的2-20种微球分别携带不同的微球识别信号；

(2)将附着有特异性捕获探针的2-20种微球、检测探针以及经细胞裂解处理的待测样品混合；从而使待测样品中的特定细菌的16S rRNA或其PCR扩增产物，与该特定细菌相应的捕获探针和微球，以及检测探针形成“微球-捕获探针-特定细菌的16S rRNA或其PCR扩增产物-检测探针”复合物；

(3)检测(2)形成的复合物中不同微球的微球识别信号以及可检测标记物，从而确定待测样品中各待测细菌的存在与否以及存在的量。

在一个优选例中，所述方法用于鉴别16S rRNA或其PCR扩增产物序列不同的细菌。

在另一优选例中，步骤(2)中，所述的待测样品仅进行细胞裂解处理，不包括PCR扩增或细胞增殖的步骤。