[发明专利]一种细胞冻存液及冻存方法

权利要求书

1.一种细胞冻存液，其特征在于：包括如下原料：

2.根据权利要求1所述的一种细胞冻存液，其特征在于：所述氯化钠注射液的质量浓度为0.9％。

3.一种细胞冻存方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)取指数生长期的细胞进行离心，弃上清，所述指数生长期的细胞为PBMC或干细胞或T淋巴细胞；

(2)用预冻存培养基重悬，然后进行离心；

(3)重复步骤(2)1-2次，然后用预冻存培养基重悬，调整细胞密度；

(4)在37℃，5％CO₂，饱和湿度条件下孵育30-60min；

(5)进行离心，弃上清；

(6)用权利要求1或2所述的细胞冻存液进行重悬，然后进行离心，弃上清；

(7)用权利要求1或2所述的细胞冻存液进行重悬，调整细胞密度，转移至冻存管；

(8)将冻存管放入程序降温仪中进行梯度降温；

(9)降温完成后，将冻存管转入液氮中进行保存。

4.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤(1)中的离心条件为23-25℃，15-20min，400-600g。

5.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤(2)中的离心条件为23-25℃，20-30min，300-400g。

6.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤(3)中，调整细胞密度为0.5-1×10⁷个细胞/ml。

7.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤(5)中的离心条件为4-6℃，10-20min，400-600g。

8.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤(6)的离心条件为4-6℃，10-20min，200-300g。

9.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤(1)和步骤(2)中的预冻存培养基包括如下原料：20-40wt％DMEM培养基，10-30wt％RPMI 1640培养基，0.11-0.14mg/L维生素C，0.03-0.09mg/L三磷酸腺苷，4-7mg/L L-半胱氨酸和0.06-0.08mg/L硫酸铁。

10.根据权利要求3所述的一种细胞冻存方法，其特征在于：所述梯度降温的具体操作为：

①降温至4℃；

②以1-3C/mS的降温速率降温至-4℃；

③以6-8C/mC的降温速率降温至-10℃；

④以0.5-0.7C/mC的降温速率降温至-20℃；

⑤以4-6C/mC的降温速率降温至-40℃；

⑥以0.8-1C/mC的降温速率降温至-50℃；

⑦以0.6-0.7C/mC的降温速率降温至-60℃；

⑧以0.3-0.5C/mC的降温速率降温至-80℃。