[发明专利]分离提取细胞中浆蛋白和核蛋白的试剂、制备方法及应用有效

申请号：	202010187349.6	申请日：	2020-03-17
公开（公告）号：	CN111363015B	公开（公告）日：	2022-03-01
发明（设计）人：	李蓉	申请（专利权）人：	江西省人民医院
主分类号：	C07K14/00	分类号：	C07K14/00;C07K1/14;C12N5/00
代理公司：	北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201	代理人：	何世磊
地址：	330000***	国省代码：	江西;36
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摘要：
搜索关键词：	分离提取细胞蛋白核蛋白试剂制备方法应用
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【权利要求书】：

1.一种分离提取细胞中浆蛋白和核蛋白的试剂，其特征在于，包括裂解液A、裂解液B和裂解液C，裂解液A的成分为：pH为7.8的6mM-12mM HEPES，9mM-11mM NaCl，0.5 mM EDTA，1mM-2mM MgCl₂；裂解液B的成分为：pH为7.8的6mM-12mM HEPES，pH 7.8，9mM-11mM NaCl，0.5 mM EDTA，1mM-2mM MgCl₂，8%-12%NP-40；裂解液C的成分为：pH为7.8的6mM-12mMHEPES，9mM-11mM NaCl，0.5 mM EDTA，1mM-2mM MgCl₂，8%-12%甘油，8%-12%SDS。

2.根据权利要求1所述的分离提取细胞中浆蛋白和核蛋白的试剂，其特征在于，包括裂解液A、裂解液B和裂解液C，裂解液A的成分为：pH为7.8的10mM HEPES，10mM NaCl，0.5 mMEDTA，1.5mM MgCl₂；裂解液B的成分为：pH为7.8的10mM HEPES，10mM NaCl，0.5 mM EDTA，1.5mM MgCl₂，10%NP-40；裂解液C的成分为：pH为7.8的10mM HEPES, 10mM NaCl，0.5 mMEDTA，1.5mM MgCl₂，10%甘油，10%SDS。

3.权利要求1所述的分离提取细胞中浆蛋白和核蛋白的试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：制备裂解液A；

步骤2：得到裂解液A后，在裂解液A基础上制备裂解液B；

步骤3：得到裂解液A后，在裂解液A基础上制备裂解液C；

其中，所述步骤1具体包括：

步骤1.1：配制HEPES溶液，浓度为6mM-12mM；

步骤1.2：配制NaCl和MgCl₂两种盐溶液，NaCl的浓度为9mM-11mM，MgCl₂的浓度为1mM-2mM；

步骤1.3：配置EDTA溶液，EDTA溶液的浓度配制成0.5 mM；

其中，所述步骤2具体包括：

在裂解液A中加入浓度8%-12%的NP-40；

其中，所述步骤3具体包括：

在裂解液A中分别加入8%-12%的甘油和8%-12%的SDS。