[发明专利]一种用于墨宝冬瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物及其应用

权利要求书

1.一种墨宝冬瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是包括以下步骤：

（1）取冬瓜子叶，提取冬瓜基因组DNA；

（2）以冬瓜基因组DNA为模板，采用引物SSR11c160进行PCR扩增，得扩增产物，其中所述引物包括引物SSR11c160的上游引物SSR11c160-F和下游引物SSR11c160-R，其中所述上游引物SSR11c160-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物SSR11c160-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

（3）将扩增产物利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；

（4）对电泳结果进行分析，引物SSR11c160能产生193bp的母本特异性标记SSR11c160₁₉₃以及225bp的父本特异性标记SSR11c160₂₂₅，同时具有母本和父本两种亲本特异性条带的单株为真正的杂交种，缺少其中任意一条条带的为假杂种，然后根据电泳结果计算种子的纯度。

2.根据权利要求1所述的墨宝冬瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤（2）中PCR扩增时，采用的反应体系包括：浓度为200ng·μL^-1的冬瓜基因组DNA 1μL，含Mg²⁺的10×PCRbuffer 2μL，2.5mM的dNTPs 1.5μL，浓度为10 mM的上游引物SSR11c160-F 1μL，浓度为10mM的下游引物SSR11c160-R 1μL，浓度为2U/μL的 Taq酶 1μL，ddH₂O补足至20μL。

3.根据权利要求1所述的墨宝冬瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤（2）中PCR扩增时，扩增程序为：95℃预变性3min后，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环后，72℃终延伸7min，置于4℃保存。

4.根据权利要求1所述的墨宝杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤（3）中聚丙烯酰胺凝胶电泳检测时采用质量百分含量为8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

5.用于墨宝冬瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物在墨宝冬瓜杂交种子以及墨宝冬瓜杂交种子纯度鉴定方面的应用，其中所 述引物包括引物SSR11c160的上游引物SSR11c160-F和下游引物SSR11c160-R，其中所述上游引物SSR11c160-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物SSR11c160-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。