[发明专利]一种欧山羊草特异分子标记获取方法及其应用

权利要求书

1.一种欧山羊草特异分子标记获取方法，其特征在于：

包括以下步骤

A提取待测欧山羊草的基因组DNA后简化基因组文库构建及高通量测序；

B序列分析以及特定基因的SLAF标签的筛选；

C测序获得的SLAF标签与已知小麦的参考基因组序列进行比对后，筛选同源性小于50％的序列进行引物设计，筛选欧山羊草特异分子标记；筛选得到的欧山羊草(U和M基因组)引物进一步利用同源性山羊草中具有特定基因的山羊草基因组供体进一步定位到欧山羊草中特定基因上。

D以小麦属植物基因组DNA为阴性对照，欧山羊草基因组DNA为阳性对照，对设计的引物进行PCR扩增后获得的欧山羊草特异分子标记。

2.根据权利要求1所述的欧山羊草特异分子标记获取方法，其特征在于，所述扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl的上游引物，1μl的下游引物，5μl的Taq PCR Mix，2μl的ddH2O。

3.根据权利要求1所述的欧山羊草特异分子标记获取方法，

其特征在于，所述PCR扩增的扩增程序为：

(1)94℃变性4min，

(2)35个循环的普通PCR程序：94℃变性1min，58℃复性1min，72℃延伸1min；

(3)72℃延伸5min；结束扩增，15℃保存。

4.根据权利要求1所述的欧山羊草特异分子标记获取方法，其特征在于，以待测欧山羊草作为阳性对照，已知小麦的DNA作为阴性对照。

5.根据权利要求1所述的欧山羊草特异分子标记获取方法，其特征在于，所述检测结果的扩增产物在6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上稳压120V电泳分离。

6.根据权利要求1所述的欧山羊草特异分子标记获取方法，其特征在于，PCR扩增通过银染法获得具有欧山羊草特异扩增大小的特异条带。

7.一种如权利要求1所述的欧山羊草特异分子标记在基因组测序的应用。