[发明专利]PTH稀土检测试剂盒及检测卡及其微球及制备与检测方法

说明书

本发明公开了PTH稀土检测试剂盒及检测卡及其微球及制备与检测方法。其中，稀土纳米荧光微球为核壳结构钕掺杂氟化钆镥包覆氟化钇钠，粒径为40nm～60nm，其组成为：NaGdxLu1‑y‑xF4:yNd@NaYF4，其中，NaGdxLu1‑xF4为基质，掺杂离子为Ndsupgt;3+/supgt;；冒号“:”表示为钕掺杂；x和y为稀土离子掺杂摩尔百分数，x的范围为20％～90％，y的范围为1％～10％；NaYF4为壳层，@表示NaYF4包覆在NaGdxLu1‑y‑xF4:yNd表面。本发明的荧光微球为稀土氟化物近红外二区发光纳米材料具有背景低，发光寿命长，荧光信号强，信噪比高等优势，标记通过共价键将微球与抗体连接，标记产物稳定，具有检测范围宽、灵敏度高、准确度高、检测快速简便等特点，可用于术中快速判断。

技术领域

本发明涉及PTH检测试剂盒及检测卡及其微球及制备与检测方法。

背景技术

甲状腺癌是全球范围内发病率上升最快的实体恶性肿瘤。目前，手术是甲状腺癌的首选治疗方式，甲状旁腺损伤是主要的手术损伤。甲状旁腺损伤导致的术后甲状旁腺功能低下仍然是困扰甲状腺外科医师的难题。

通常甲状旁腺不易与脂肪滴、淋巴结、异位甲状腺及异位胸腺相区别。甲状旁腺分泌甲状旁腺激素（parathyroid hormone related peptide，简称PTH），且PTH仅在甲状旁腺内被特异性表达，其他组织均不能表达PTH，因此通过术中对待检组织液进行PTH检测，可提高医生在临床中快速识别甲状旁腺的效能与效率。

现有技术中测定PTH的检测方法主要是电化学发光法和免疫荧光法，电化学发光法灵敏度高，检测结果准确，但是需要特定的大型仪器，样本大多数为血液样本，且测试时间长不利于术中快速判断。

免疫荧光法是将PTH抗体共价结合于荧光微球表面活性基团上，通过激发后检测线是否产生荧光来判断结果，快速便捷可准确定量同时具有高灵敏度、标记物稳定等优点，在医学免疫检测领域广泛应用。然而在生物流体和血清中的许多复合物和蛋白本身就可以发荧光，而常用的荧光标记物光谱范围大多在可见光区（400~750nm），使用可见区的荧光标记物会产生较强的背景荧光，干扰检测信号，降低检测的灵敏度。

因此开发一种具有检测范围宽、灵敏度高、快速测定组织洗脱液中PTH、检测准确度高且适合术中使用的试剂盒及方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术存在的问题，提供一种检测范围宽、灵敏度高、快速的PTH检测试剂盒及检测卡及其微球及制备与检测方法。

实现本发明目的的技术方案分成六个方面：

本发明的第一个技术方案是：稀土纳米荧光微球，为核壳结构钕掺杂氟化钆镥包覆氟化钇钠，粒径为40nm~60nm，其组成为：

NaGdxLu1-y-xF4:yNd@NaYF4，其中，NaGdxLu1-xF4为基质，掺杂离子为Nd³⁺；冒号“:”表示为钕掺杂；x和y为稀土离子掺杂摩尔百分数，x的范围为20%～90%，y的范围为1%~10%；NaYF4为壳层，@表示NaYF4包覆在NaGdxLu1-y-xF4:yNd表面。

进一步的，所述稀土纳米荧光微球在基态下稳定，在800~1000 nm的激发光源作用下发射出波长范围在1000~1100 nm的荧光。

本发明的第二个技术方案是制备稀土纳米荧光微球的方法，包括以下步骤：

步骤一：合成钕掺杂氟化钆镥：在容器中，加入油酸、1-十八烯、钆的硝酸盐或醋酸盐或氯化物、钕的硝酸盐或醋酸盐或氯化物、镥的硝酸盐或醋酸盐或氯化物、NaOH和氟化铵甲醇混合溶液，并进行反应；随后用环己烷乙醇混合液洗涤，分散于环己烷中，得到NaGdxLu1-y-xF4:yNd纳米探针环己烷溶液；