[发明专利]单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法有效
| 申请号： | 202010193439.6 | 申请日： | 2020-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN111378614B | 公开（公告）日： | 2021-10-15 |
| 发明（设计）人： | 李胜利;郑宇慧;刘钢;王蔚;曹志军;杨红建;王雅晶 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 黄爽 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单层 致密 奶牛 乳腺 上皮 细胞培养 方法 | ||
1.单层致密奶牛乳腺上皮细胞培养方法，其特征在于，将奶牛乳腺上皮细胞接种于上室铺设有胶原蛋白的带膜Transwell嵌套多孔板的上室中，随后进行两阶段的细胞培养，即奶牛乳腺上皮细胞接种后48h内采用培养基1进行培养，随后72h采用培养基2进行培养；
其中，培养基1为含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、15ng/mL人表皮生长因子、1％ITS的DMEM/F12培养基；
培养基2为含有5％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和1％ITS的DMEM/F12培养基；
ITS为含有1g/L胰岛素、0.55g/L转铁蛋白和0.00067g/L亚硒酸钠的溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将奶牛乳腺上皮细胞以104～105个/孔接种于上室铺设有胶原蛋白的带膜Transwell嵌套多孔板的上室中，于37℃、5％CO2条件下培养。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用培养基1进行培养时，每24h更换一次培养基。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用培养基2进行培养时，每48h更换一次培养基。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶原蛋白的浓度为0.012mg/mL。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述胶原蛋白为鼠尾胶原蛋白，用于铺设多孔板的胶原蛋白溶液以0.36g/L乙酸溶液配制。
7.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述带膜Transwell嵌套多孔板为12孔板。
8.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述带膜Transwell嵌套多孔板中膜的材质为聚酯膜，嵌套直径为6.5mm，嵌套膜生长面积为0.33cm2，膜的孔径为0.4μm，膜厚度为10μm。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业大学，未经中国农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010193439.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种神经阻滞套管组件
- 下一篇：一种钢筋的半自动输送装置及其施工工艺
