[发明专利]一种基于反相二维液相色谱的烟碱旋光异构体分离测定方法

权利要求书

1.一种基于二维液相色谱的烟碱旋光异构体分离测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

①样品前处理：将样品加入适量甲醇中萃取，取上层清液得待测液；

②样品检测：将步骤①得到的待测液进行反向二维液相色谱检测，采用峰面积归一化法测定待测液中的碱旋光异构体即S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的相对含量；

③S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的定量测定：配制标准工作溶液，建立S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱建立线性回归方程，对待测液中S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱进行准确的定量分析；

步骤②中液相色谱条件如下：

一维色谱柱：Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18，色谱柱规格为：4.6*50 mm，2.7 µm；流速1 mL/min；流动相A：50 mmol/L的醋酸铵溶液；流动相B：甲醇；梯度洗脱，洗脱顺序见下表：

定量环，40 ~500µL；

二维液相色谱柱：Agilent InfinityLab Poroshell Chiral-T，色谱柱规格为：4.6*150 mm，2.7um；流动相包括：甲醇= 45v/v%，乙腈= 55 v/v %；流速1 mL/min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的样品包括烟叶、烟丝、传统卷烟、加热卷烟、电子烟烟油或烟草提取物中的一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤①中的烟草样品与甲醇的固液比为1g:10ml～1g:200ml，萃取方式为振荡萃取、超声萃取中的一种，萃取时间为10～180 min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二维液相色谱柱的流动相还含有0.25v/v%的醋酸及0.05v/v%三乙胺。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤②中所用仪器为光电二极管阵列检测器，其参考检测波长为255～265 nm，柱温箱：25～35 ℃，进样量：2～5 μL。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤②中检测步骤包括：一维色谱柱对进样样品进行初步分离富集净化，目标物在一维色谱柱出峰的时间段内通过切换阀进行精准切割，切割后的目标物进入定量环保留；然后二维流动相将目标物从定量环转移至二维液相色谱柱，实现对烟碱同分异构体的分离。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤③中的标准工作溶液的配制使用的溶剂为甲醇、异丙醇中的一种。

8.根据权利要求1所述的方法用于含烟碱的样品中烟碱来源的辅助识别方法的用途。