[发明专利]一种基于反相二维液相色谱的烟碱旋光异构体分离测定方法

说明书

本发明公开了一种基于二维液相色谱的烟碱旋光异构体分离测定方法，包括以下步骤：①样品前处理；②样品检测；③S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的定量测定。本发明的分离测定方法首次采用了反相二维液相色谱体系，稳定性大大提高；本发明还提供了一种含烟碱的样品或纯烟碱样品中烟碱来源的辅助识别方法。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种基于反相二维液相色谱的烟碱旋光 异构体分离测定方法。

背景技术

烟碱是烟草和烟气中含量最丰富的生物碱，是烟草最重要的生理性活性成 分。烟碱分子含有一个手性中心，有两个旋光体：S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱，两者 在烟草中含量、代谢机理和生理特性完全不同。已报道的烟碱手性分离方法主要 有毛细管电泳法、核磁共振法(NMR)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱 (GC)及其联用法等。

烟碱旋光异构体的构成比例是烟草特征性成分之一。2018年发布了烟草行 业标准YC/T 561—2018《烟草特征性成分烟碱旋光异构体比例的测定高效 液相色谱法和超高效合相色谱—串联质谱法》，推荐了两种烟碱旋光异构体比例 的测定方法，即正相手性柱分离的高效液相色谱法和超高效合相色谱—串联质谱 法。这两种测定方法的色谱体系受试剂和环境中水分影响较大，保留时间不稳定； 同时由于液相色谱方法反相色谱和正相色谱之间溶剂体系切换所需时间长，而且 对仪器稳定性影响较大，不利于实验室多种方法的开展和仪器维护。另外，由于 烟碱两个对映体含量差别较大，对测定方法的灵敏度要求较高，对于较为复杂的 基质，有效排除杂质干扰是方法准确度的保证；标准所推荐的两种测定方法难以 达到要求。

为解决上述问题提出本发明。

发明内容

本发明首次提出了基于反相二维液相色谱分离烟草及烟草制品中烟碱的旋 光异构体的测定方法。通过在一维柱中对烟碱的富集、净化和精准切割，再在二 维液相中进行手性分离，有效解决了烟草复杂基质的干扰，方法稳定性好，灵敏 度高，适用于富杂基质中烟碱的旋光异构体的分离和测定。

本发明的技术方案如下：

本发明第一方面公开了一种基于二维液相色谱的烟碱旋光异构体分离测定 方法，包括以下步骤：

①样品前处理：将样品加入适量甲醇中萃取，取上层清液得待测液；

②样品检测：将步骤①得到的待测液进行反向二维液相色谱检测，采用峰面 积归一化法测定待测液中的碱旋光异构体即S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的相对含量；

③S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的定量测定：配制标准工作溶液，建立S-(-)-烟碱 和R-(+)-烟碱建立线性回归方程，对待测液中S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱进行准确的 定量分析。

优选地，所述的样品包括烟叶、烟丝、传统卷烟、加热卷烟、电子烟烟油 或烟草提取物中的一种。

优选地，步骤①中的烟草样品与甲醇的固液比为1:10～1:200(g:mL)， 萃取方式为振荡萃取、超声萃取中的一种，萃取时间为10～180min。

优选地，步骤②中液相色谱条件如下：

一维色谱柱：Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18，(4.6*50mm，2.7μm)； 流速1mL/min；流动相A：50mmol/L的醋酸铵溶液；流动相B：甲醇；梯度洗 脱，洗脱顺序见下表：

梯度洗脱顺序

定量环，40～500μL；

二维液相色谱柱：Agilent InfinityLab Poroshell Chiral-T，(4.6*150mm，2.7um)；流动相包括：甲醇＝45v/v％，乙腈＝55v/v％；流速1mL/min。