[发明专利]一种黄瓜果实刺瘤石蜡切片制作方法

说明书

本发明公开了一种黄瓜果实刺瘤石蜡切片制作方法，其包括如下步骤：(1)选取合适发育时期的黄瓜果实刺瘤材料立即放入装有FAA固定液的容器瓶中，轻晃动容器瓶至少一次，待黄瓜果实刺瘤材料沉于液面后固定30min；(2)然后将容器瓶中的FAA固定液全部倒掉，再次加入新的FAA固定液到容器瓶中，然后用封口膜封住瓶口，固定至少48h；(3)然后将容器瓶中的FAA固定液再次全部倒掉，加入浓度50％乙醇到容器瓶中诱导1h；(4)最后依次进行整染、脱水、透明、浸蜡与包埋、切片及粘片及展片、脱蜡与染色、封片。通过本发明获得的切片组织完整，结构清晰，可操作性和实用性强，是观察果实刺瘤解剖学结构的有效方法。

技术领域

本发明涉及一种石蜡切片制作方法，具体涉及一种黄瓜果实刺瘤石蜡切片制作方法。

背景技术

黄瓜是世界普遍栽培蔬菜作物，也是中国保护地生产第一大作物，对保障蔬菜周年供应起着重要的作用。黄瓜果实属于瓠果，果实均有刺，但不均有果瘤。果瘤是黄瓜果实表面瘤状突起，是黄瓜特有性状。果瘤有无与果刺多少、果刺大小、果皮和果刺颜色等均属于外观品质性状，与黄瓜的经济价值密切相关。与黄瓜有果瘤品种相比，无果瘤品种具有外观光滑、残留农药低、清洗方便、易运输、包装和储存等优点，其市场价格为普通黄瓜的2-3倍。果实刺瘤性状的研究将促进黄瓜品质育种进程，本研究通过获得刺瘤石蜡切片操作技术，了解刺瘤性状发生细胞学机制，为果瘤性状分子机制的研究奠定基础。

石蜡切片是最为常见的显微制片技术，因其便捷、易操作、成本低、可永久保存等特点，已广泛用于植物材料的形态解剖学观察，但不同植物、不同器官其组织结构存在差异，不能统一适用，因此摸索针对不同植物、器官和组织获得适宜石蜡切片制作流程尤为重要。

目前，应用于制备黄瓜果实刺瘤石蜡切片的技术研究较少且切片效果并不理想，主要问题在于黄瓜果刺细小脆弱，容易造成切片不完整、组织结构不清晰。为了更好揭示刺瘤性状形态建成的机制，需要获得一种适宜于黄瓜果实刺瘤的石蜡切片制作方法。

发明内容

本发明为了解决上述问题，从而提供一种黄瓜果实刺瘤石蜡切片制作方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

一种黄瓜果实刺瘤石蜡切片制作方法，所述切片制作方法包括如下步骤：

(1)选取合适发育时期的黄瓜果实刺瘤材料立即放入装有FAA固定液的容器瓶中，轻晃动容器瓶至少一次，待黄瓜果实刺瘤材料沉于液面后固定30min；

(2)然后将容器瓶中的FAA固定液全部倒掉，再次加入新的FAA固定液到容器瓶中，然后用封口膜封住瓶口，固定至少48h；

(3)然后将容器瓶中的FAA固定液再次全部倒掉，加入浓度50％乙醇到容器瓶中诱导1h；

(4)最后依次进行整染、脱水、透明、浸蜡与包埋、切片及粘片及展片、脱蜡与染色、封片。

在本发明的一个优选实施例中，所述FAA固定液由质量浓度38％甲醛水溶液、冰醋酸和浓度100％乙醇以体积比为2：1：10混合配制而成。

在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(2)中的储藏条件为：常温储藏或置于4度冰箱中储藏。

在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(3)中的整染步骤为：将黄瓜果实刺瘤材料整体放入含有埃氏苏木精稀释液的容器瓶中染色3-5天，每天轻轻晃动容器瓶1-2次，所述埃氏苏木精稀释液的体积为黄瓜果实刺瘤材料的10-15倍。