[发明专利]一种大白菜的育种方法

权利要求书

1.一种大白菜的育种方法，包括以下步骤：

1)对黄芯春大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带Crr1a纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第一亲本；

对山地王2号大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带Crr3纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第二亲本；

对CR-福将大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带CRc纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第三亲本；

2)以第一亲本为母本，第二亲本为父本进行杂交，得到第一F1代种子；

3)将所述第一F1代种子种植后，进行自交，得到第一F2代种子，将所述第一F2代种子种植后，筛选基因型为R_Crr1aR_Crr1aR_Crr3R_Crr3的抗性位点纯合单株，得到第四亲本；

4)以第四亲本为母本，第三亲本为父本进行杂交，得到第二F1代种子；

5)将所述第二F1代种子种植后，进行自交，得到第二F2代种子，将所述第二F2代种子种植后，筛选基因型为R_Crr1aCrr1aR_Crr3Crr3R_CRcCRc的抗性位点纯合单株，得到白菜新品种。

2.根据权利要求1所述的育种方法，其特征在于，步骤3)中利用PCR扩增对根肿病抗性位点检测和根肿病抗性鉴定，筛选得到基因型为R_Crr1aR_Crr1aR_Crr3R_Crr3的抗性位点纯合单株；所述根肿病抗性位点检测包括Crr1a抗性位点检测和Crr3抗性位点检测。

3.根据权利要求1所述的育种方法，其特征在于，步骤5)中利用PCR扩增对根肿病抗性位点检测和根肿病抗性鉴定，筛选得到基因型为R_Crr1aCrr1aR_Crr3Crr3R_CRcCRc的抗性位点纯合单株；所述根肿病抗性位点检测包括Crr1a抗性位点检测、Crr3抗性位点检测和CRc抗性位点检测。

4.根据权利要求2或3所述的育种方法，其特征在于，所述Crr1a抗性位点检测包括以下步骤：

以待检测大白菜的基因组DNA为模板，利用第一引物组进行第一PCR扩增，得到第一扩增产物；对第一扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，当PCR片段大小为950bp时，判断为抗性位点；当PCR片段大小为580bp时，判断为感病位点；

所述第一引物组包括Crr1a-F和Crr1a-R；所述Crr1a-F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述Crr1a-R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述第一PCR扩增的反应体系以20μL计，包括：12.6μL ddH₂O，2μL10×PCR Buffer，1.6μL dNTPs，Crr1a-F和Crr1a-R各0.8μL，0.2μLAceTaq酶，2μL模板；

所述第一PCR扩增的程序为：94℃、5min；94℃、1min，55℃、2min，72℃、4min，35个循环；72℃、5min。