[发明专利]一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒及其制备方法，属于试剂盒领域。该试剂盒包括：沙门氏菌的apt‑Fe₃O₄@Ag NPs纳米探针、过氧化氢刻蚀剂、脲酶溶液和尿素/苯酚红试纸。本发明还提供一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒的制备方法。本发明利用免疫磁珠与纳米粒子复合结构对鼠伤寒沙门氏菌检测，利用酶抑制法通过试纸显色,缩短了检测时间,定量检测时变异系数小，最低检测浓度为21cfu·mL^‑1,加标回收率达到96.18％,灵敏度高,稳定性好。

技术领域

本发明属于试剂盒领域，具体涉及一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒及其制备方法。

背景技术

鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium，S.typhimurium)是一种革兰氏阴性肠道杆菌，是导致食源性疾病爆发的最常见病原体之一。沙门氏菌通常通过动物粪便污染食品，如鸡蛋、果蔬、肉类和牛奶等。沙门氏菌感染可引起典型的肠胃炎反应，如腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热和其他肠胃炎症状。据报道，沙门氏菌引起的食物中毒仍然呈上升的趋势。目前，该菌是鸡蛋、肉类和牛奶等农副产品的必检致病菌。

当前，我国沙门氏菌的传统检测方法以微生物培养法为主，全程需要3-5天，操作繁琐，耗时长，已不能满足人们对食品安全检测快速简便的要求。随着技术的不断发展，推动着检测方法的不断更新，越来越多的方法应用于检测沙门氏菌，如PCR技术、酶联免疫吸附法(ELISA)、环介导等温扩增技术(LAMP)等。PCR技术可在短时间内放大检测信号，具有灵敏度高的特点，但是PCR的操作过程要求专业人员进行而且易出现假阳性。ELISA法是基于抗原抗体的特异性结合进行检测，无需大型仪器，但是耗时长，灵敏度低。LAMP作为一种新兴的检测技术，具有费用低，灵敏度和特异性高的优点，但是LAMP需要选择性增菌培养，所以并不适用于样品的现场检测。所以，非常必要开发一种快速，灵敏度高，特异性强的检测方法来实现对食源性致病菌的监控，以保障食品安全。

发明内容

本发明目的是提供一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒及其制备方法，该试剂盒基于适配体-Fe₃O₄@Ag纳米探针与尿素/苯酚红试纸，能够快速、灵敏、简便地检测沙门氏菌。

本发明首先提供一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒，包括：

沙门氏菌的apt-Fe₃O₄@Ag NPs纳米探针、过氧化氢刻蚀剂、脲酶溶液和尿素/苯酚红试纸。

本发明还提供一种检测鼠伤寒沙门氏菌的试剂盒的制备方法，包括：

步骤一：Fe₃O₄纳米粒子的制备

将FeCl₃·6H₂O、柠檬酸钠和CH₃COONa·3H₂O在乙二醇中室温磁搅拌至完全溶解，然后将所得均质溶液转移至反应釜内,将反应釜放置于烘箱中反应，用永磁铁从反应溶液中分离黑褐色的固体物质，清洗后得到具有超顺磁性的Fe₃O₄纳米粒子；

步骤二：Fe₃O₄@Ag磁性纳米粒子的制备

将AgNO₃和聚乙烯吡咯烷酮k-30溶于聚乙二醇中，充分溶解后，加入步骤一制备的Fe₃O₄纳米粒子分散其中进行反应，用永磁铁从反应溶液中分离褐色的固体物质，清洗后得到Fe₃O₄@Ag磁性纳米粒子；

步骤三：apt-Fe₃O₄@Ag NPs纳米探针的制备