[发明专利]人源Tsg101-Vps28-Vps37-Mvb12A四元复合物的制备方法及应用有效
| 申请号： | 202010196353.9 | 申请日： | 2020-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN111378688B | 公开（公告）日： | 2022-10-04 |
| 发明（设计）人： | 段良伟;郑前前;王辉;姜贞贞;董琳炜 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 453003 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人源 tsg101 vps28 vps37 mvb12a 复合物 制备 方法 应用 | ||
1.人源Tsg101-Vps28-Vps37-Mvb12A四元复合物的制备方法，其特征在于，包括：分别针对Tsg101、Vps28、Vps37和Mvb12A设计截短体；获取组成人源ESCRT-I复合物的四种亚基的截短体编码序列片段；分别克隆至昆虫表达载体中，并分别转化DH10Bac感受态细胞获得重组Bacmid杆粒；将四种重组Bacmid杆粒分别转染sf9昆虫细胞产生杆状病毒并扩增至P2代病毒储液，将四种P2代病毒等比例感染sf9细胞进行目的蛋白的表达，经两步层析纯化即获取人源ESCRT-I四元蛋白复合物；
Tsg101、Vps28、Vps37和Mvb12A的截短体氨基酸序列分别见序列表SEQ ID No.1 -SEQID No.4所示；
编码Tsg101、Vps28、Vps37和Mvb12A的截短体氨基酸的碱基序列分别见序列表SEQ IDNo.5 -SEQ ID No.8所示。
2.根据权利要求1所述的人源Tsg101-Vps28-Vps37-Mvb12A四元复合物的制备方法，其特征在于：以人源cDNA为模板，通过PCR扩增获取组成人源ESCRT-I复合物的四种亚基的截短体编码序列片段；PCR扩增涉及的引物序列分别见SEQ ID No.9 -SEQ ID No.16所示。
3.根据权利要求1所述的人源Tsg101-Vps28-Vps37-Mvb12A四元复合物的制备方法，其特征在于：所述昆虫表达载体为pFastBacHTA表达载体。
4.根据权利要求1所述的人源Tsg101-Vps28-Vps37-Mvb12A四元复合物的制备方法，其特征在于：所述感受态细胞为DH10Bac感受态细胞。
5.根据权利要求1所述的人源Tsg101-Vps28-Vps37-Mvb12A四元复合物的制备方法，其特征在于：所述分离、纯化包括收集细胞进行超声破碎，高速离心收集上清液，然后将上清液进行镍柱亲和层析，之后进行凝胶排阻色谱层析。
6.如权利要求1-5任一所述的人源Tsg101-Vps28-Vps37-Mvb12A四元复合物的制备方法在制备人源Tsg101-Vps28-Vps37-Mvb12A四元复合物中的应用。
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