[发明专利]一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法及应用

权利要求书

1.一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、构建过表达GM-CSF和跨膜过表达GM-CSF的质粒；

S2、获得离体肿瘤细胞进行原代肿瘤细胞培养，并获得原代肿瘤细胞；

S3、包装过表达GM-CSF和跨膜过表达GM-CSF的慢病毒颗粒；

S4、用慢病毒颗粒对所述步骤S2得到的原代肿瘤细胞进行感染，得到过表达GM-CSF和跨膜过表达GM-CSF的原代肿瘤细胞；

S5、将所述S4得到的原代肿瘤细胞及培养液进行X线照射，收集放疗后的上清液，获得所需微颗粒和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物；

S6、将所述S5得到的混合物进行离心，即得到所述基因工程改造的抗肿瘤微颗粒。

2.根据权利要求1所述的一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法，其特征在于，S6中所述离心包括依次进行第一离心、第二离心、第三次离心，所述第一离心的转速为1000g，时间为10分钟，得上清；第二离心的转速为14000g，时间为2分钟，得上清；第三次离心的转速为14000g，时间为60分钟，得沉淀即为微颗粒。

3.根据权利要求1所述的一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法，其特征在于，所述S5的X线放射剂量为5-20Gy，X线能量为6MV，上清液收集时间为放疗后的第2-7天。

4.根据权利要求1所述的一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法，其特征在于，所述离体肿瘤细胞为自体来源的肿瘤细胞或肿瘤细胞系产生的肿瘤细胞。

5.根据权利要求1所述的一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法，其特征在于，所述离体肿瘤细胞来自于实体瘤。

6.权利要求1-5任意一项所述的一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法，其特征在于，其制得的抗肿瘤微颗粒，经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒为携载GM-CSF的微囊泡结构，所述微囊泡结构的粒径为100-1000nm。

7.一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒药剂，其特征在于，由权利要求1-5中任一项所述的经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒通过纯化和浓缩而获得。

8.权利要求1-5所述的任意一项所述的一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法制得的经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒在制备抗肿瘤药物中的应用。