[发明专利]一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法及应用

说明书

本发明提供一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法，包括以下步骤：S1、构建过表达GM‑CSF和跨膜过表达GM‑CSF的重组质粒；S2、获得离体肿瘤细胞进行原代肿瘤细胞培养，并获得原代肿瘤细胞；S3、包装过表达GM‑CSF和跨膜过表达GM‑CSF的慢病毒颗粒；S4、用慢病毒颗粒对所述步骤S2得到的原代肿瘤细胞进行感染，得到过表达GM‑CSF和跨膜过表达GM‑CSF的原代肿瘤细胞；S5、将所述步骤S4得到的原代肿瘤细胞及培养液进行X线照射，收集放疗后的上清液，获得所需微颗粒和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物；S6、将所述步骤S5得到的混合物进行离心，本发明可解决常规局部化疗效果差、副作用大、易产生耐药性、对机体免疫产生抑制的技术问题。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤技术领域，具体为一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法及应用。

背景技术

放射治疗是临床常规治疗肿瘤的有效治疗手段，肿瘤放射治疗是利用放射线产生的电离辐射来治疗肿瘤的一种局部治疗方法。大约70％以上的肿瘤患者在治疗的过程中需要用放射治疗，约有40％的癌症可以用放疗根治。放射治疗在肿瘤治疗中的作用和地位日益突出，已成为治疗恶性肿瘤的主要手段之一，尤其在头颈肿瘤、乳腺癌、肺癌和宫颈癌等一些肿瘤治疗中发挥着重要作用。但临床上有些肿瘤并不常规接受放射治疗，如胃癌、结肠癌、膀胱癌、肾癌，以及恶性胸腔积液(Malignant pleural effusion,MPE)等。虽然采用粒子植入等肿瘤内照射方式可以扩大放疗的适应症，但对外科手术技能要求较高，且存在手术风险。另外，此种方式也无法针对MPE进行治疗。

基因工程(genetic engineering)，又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入宿主细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新的表征。本技术的主要工具包括酶(限制性核酸内切酶和DNA连接酶)和载体(主要有质粒载体、噬菌体载体、Ti质粒和人工染色体等)，主要步骤为提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测和表达。目前，基因工程技术在各个领域具有广泛的应用，尤其是医药卫生领域。基因工程药品(如基因工程胰岛素、基因工程干扰素等)是指将生物合成相应药物成分的基因导入微生物细胞内，让它们产生相应的药物后提取药物，在解决产量问题的同时可大大降低生产成本。基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效的手段。但基因治疗技术尚未成熟，一些关键问题尚未解决，如如何选择有效的治疗基因等。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法、药剂及应用，该抗肿瘤微颗通过间接放疗并趋化免疫细胞至肿瘤微环境中以实现抗肿瘤，解决常规局部化疗效果差、副作用大、易产生耐药性、对机体免疫产生抑制的技术问题。

本发明是由以下技术手段实现的：

一种经基因工程改造的抗肿瘤微颗粒的制备方法，包括以下步骤：

S1构建过表达GM-CSF和跨膜过表达GM-CSF的质粒；

S2获得离体肿瘤细胞进行原代肿瘤细胞培养，并获得原代肿瘤细胞；

S3包装过表达GM-CSF和跨膜过表达GM-CSF的慢病毒颗粒；

S4用慢病毒颗粒对所述步骤S2得到的原代肿瘤细胞进行感染，得到过表达GM-CSF和跨膜过表达GM-CSF的原代肿瘤细胞；

S5将所述步骤S4得到的原代肿瘤细胞及培养液进行X线照射，收集放疗后的上清液，获得所需微颗粒和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物；

S6将所述步骤S5得到的混合物进行离心，即得到所述基因工程改造的抗肿瘤微颗粒。