[发明专利]一种土壤中反硝化细菌nirS基因绝对定量检测的引物和试剂盒在审
| 申请号： | 202010198959.6 | 申请日： | 2020-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN111235237A | 公开（公告）日： | 2020-06-05 |
| 发明（设计）人： | 汪义龙 | 申请（专利权）人： | 江苏为青生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 周敏;汪青 |
| 地址： | 215345 江苏省苏州市昆山*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 土壤 硝化细菌 nirs 基因 绝对 定量 检测 引物 试剂盒 | ||
1.一种土壤中反硝化细菌nirS基因绝对定量检测的引物，其特征在于：所述的引物的正向引物序列与GCAGCCCGAGTACAACAAG具有至少85％的同源性，反向引物序列与TCCAGACCGAGAACCACAC具有至少85％的同源性。
2.根据权利要求1所述的土壤中反硝化细菌nirS基因绝对定量检测的引物，其特征在于：所述的引物的正向引物序列与GCAGCCCGAGTACAACAAG具有至少90％的同源性，反向引物序列与TCCAGACCGAGAACCACAC具有至少90％的同源性。
3.根据权利要求2所述的土壤中反硝化细菌nirS基因绝对定量检测的引物，其特征在于：所述的引物的正向引物序列与GCAGCCCGAGTACAACAAG具有至少94％的同源性，反向引物序列与TCCAGACCGAGAACCACAC具有至少94％的同源性。
4.根据权利要求3所述的土壤中反硝化细菌nirS基因绝对定量检测的引物，其特征在于：所述的引物的正向引物序列为GCAGCCCGAGTACAACAAG，反向引物序列为TCCAGACCGAGAACCACAC。
5.一种土壤中反硝化细菌nirS基因绝对定量检测的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括权利要求1至4中任一项所述的引物。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括进行定量PCR检测时所需试剂。
7.一种土壤中反硝化细菌nirS基因的绝对定量检测方法，其特征在于：采用权利要求1至4中任一项所述的引物，或者权利要求5或6所述的试剂盒按照定量PCR检测方法进行检测。
8.根据权利要求7所述的绝对定量检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)提取待测土壤中的DNA；
(2)提供标准品；
(3)将步骤(1)提取的DNA利用所述的引物进行定量PCR扩增；
(4)利用步骤(2)的标准品拟合标准曲线；
(5)利用步骤(3)的检测结果及步骤(4)的标准曲线计算待测土壤中反硝化细菌nirS基因的拷贝数。
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