[发明专利]一种登革病毒通用型RT-RAA-LFD扩增引物及检测方法在审
| 申请号： | 202010200620.5 | 申请日： | 2020-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN111334610A | 公开（公告）日： | 2020-06-26 |
| 发明（设计）人： | 穆小萍;罗娅莎;熊玉锋;赖科峰;叶青;郑淑华;郭军飞 | 申请（专利权）人： | 广东省妇幼保健院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12Q1/6804;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 陈洁娣;莫瑶江 |
| 地址： | 510010 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 通用型 rt raa lfd 扩增 引物 检测 方法 | ||
1.一组基于恒温扩增RT-RAA-LFD技术的登革病毒通用型扩增引物，其特征在于，所述的扩增引物如下所示：
RAA-F：5'-GGAAGCTGTACGCATGGGGTAGCAGACTAGTG-3'；
RAA-R：5'-GATCTCTGGTCTCTCCCAGCGTCAATATGCTGTT-3'。
2.根据权利要求1所述的登革病毒通用型扩增引物，其特征在于，所述的正、反向引物的5'端分别用6-羧基荧光素和生物素进行标记。
3.一种基于恒温扩增RT-RAA-LFD技术的登革病毒检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的登革病毒通用型扩增引物和包被了胶体金标记的抗FAM抗体和链霉亲和素的侧向流试纸。
4.根据权利要求3所述的登革病毒检测试剂盒，其特征在于，还含有RAA反应缓冲液、去核酸酶水、冻干酶粉、醋酸镁。
5.一种基于恒温扩增RT-RAA-LFD技术的登革病毒检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以权利要求1所述的引物对RAA-F/RAA-R作为扩增的上下游引物，将25μL RAA反应缓冲液、1.25μM RAA-F和1.25μM RAA-R各2μL、1μL模板、17.5μL去核酸酶水，加至含有冻干酶粉的200μL EP管中，最后加入2.5μL 280mM醋酸镁，在37℃恒温条件下反应20分钟，获得扩增产物；
(2)取5μL扩增产物加入100μL的样品缓冲液中，充分混匀后取60μL加至包被了胶体金标记的抗FAM抗体和链霉亲和素的侧向流试纸条加样区，3分钟即可读取结果，质控线与检测线同时呈红色为阳性结果，只有质控线呈红色为阴性结果，质控线不显色提示实验失败。
6.权利要去1所述的登革病毒通用型扩增引物或权利要去2所述的登革病毒检测试剂盒在检测登革病毒中的应用。
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