[发明专利]使用四甘醇单十烷基醚进行膜蛋白复合物的非变性质谱分析方法

权利要求书

1.使用四甘醇单十烷基醚进行膜蛋白复合物的非变性质谱分析方法，其特征在于，具体步骤如下：

第一步，将纯化的膜蛋白复合物在四甘醇单十烷基醚存在下用超滤膜进行脱盐处理，将脱盐后的膜蛋白复合物置换到含有四甘醇单十烷基醚的、pH8.0的醋酸铵缓冲液中，蛋白质标准品置换到pH7.4的醋酸铵缓冲液中，所述的膜蛋白复合物为BtuCD膜蛋白复合物、ATPase复合物、血红素转运蛋白复合物或铁转运蛋白复合物；

第二步，将第一步得到的膜蛋白复合物溶液采用含有四甘醇单十烷基醚的醋酸铵缓冲溶液进行透析，进一步去除原始溶液中的表面活性剂，得到含有四甘醇单十烷基醚的膜蛋白复合物溶液；

第三步，在相同的质谱条件下，分别对溶液中含有四甘醇单十烷基醚的膜蛋白复合物和蛋白质标准品进行质谱分析，获得其非变性质谱数据并采集各自的离子淌度数据；

第四步，将得到的离子淌度数据处理，得到膜蛋白复合物和蛋白质标准品的漂移时间分布；

第五步，根据蛋白质标准品的漂移时间分布和理论碰撞横截面积，以及膜蛋白复合物的漂移时间分布，得到膜蛋白复合物的碰撞横截面积。

2.根据权利要求1所述的非变性质谱分析方法，其特征在于，第一步中，膜蛋白复合物脱盐时，温度为4℃，离心转速为14000rcf，时间不低于30min，重复不少于5次。

3.根据权利要求1所述的非变性质谱分析方法，其特征在于，第一步中，所述的蛋白质标准品为乙醇脱氢酶、刀豆蛋白、抗生物素蛋白、β-乳球蛋白、肌球蛋白、细胞色素c或血清淀粉样蛋白。

4.根据权利要求1所述的非变性质谱分析方法，其特征在于，第三步中，离子淌度质谱仪条件为：针尖电压1.5kV，锥孔电压10V，源补偿电压10V，一级碰撞室电压2V，二级碰撞室电压2V，一级碰撞室和离子淌度分离室之间的反电压28V，碰撞室内氩气流速2mL/min，氦气室气体流速150mL/min，离子淌度分离室中用氮气做分离气体且流速为60mL/min，离子淌度分离室行波速度1100m/s，离子淌度分离室行波振幅37V。