[发明专利]一种新冠病毒、甲乙流感及呼吸道合胞病毒检测试剂盒

权利要求书

1.一组新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒核酸联合检测引物与探针组合，其特征在于，包括如下组分：

（1）用于检测2019-nCoV ORF1ab靶基因的引物对和探针，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：1-3所示；

（2）用于检测2019-nCoV 核壳蛋白N靶基因的引物对和探针，其核苷酸序列依次如SEQID NO：4-6所示；

（3）用于检测甲型流感病毒靶基因的引物对和探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：7-9所示；

（4）用于检测乙型流感病毒靶基因的引物对和探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：10~11的引物和SEQ ID NO：12所示；

（5）用于检测呼吸道合胞病毒靶基因的引物对和探针，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：13-15所示；

（6）用于检测内标B2M的引物对和探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：16-18所示。

2.根据权利要求1所述引物与探针组合，其特征在于，所述探针的两端均分别标记最大发射波长518nm、538nm~553nm、 574nm~575nm、607nm~615nm、640nm、666nm~667nm、690nm染料的其中一种并且不同。

3.根据权利要求1所述引物与探针组合，其特征在于，所述探针的5’端标记ROX、FAM、HEX或CY5荧光发生基团，3’端标记MGB。

4.根据权利要求1所述引物与探针组合，其特征在于，SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：6所示探针的5’端标记ROX荧光发生基团，3’端标记MGB；

SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：12所示探针的5’端标记FAM荧光发生基团，3’端标记MGB

SEQ ID NO：15所示探针的5’端标记HEX荧光发生基团，3’端标记MGB；

SEQ ID NO：18所示探针的5’端标记CY5荧光发生基团，3’端标记MGB。

5.权利要求1-4任一项所述引物与探针组合在制备新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒核酸联合检测试剂盒中的应用。

6.一种新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述引物与探针组合。

7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，用于检测靶基因的探针使用浓度为180-220nM，用于检测内标的探针使用浓度为80-120 nM，用于检测靶基因的上下游引物使用浓度为180-220nM，用于检测内标的引物使用浓度为80-120 nM。

8.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，还包括PCR缓冲液，其组成为：26-30mol/LpH8-8.5 Tris-HCl，15-25mmol/L (NH₄)₂SO₄，28-32mmol/L KC1，3.5-4.5mmol/ L MgCl₂，0.15-0.25mol/ L dNTPs。

9.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，还包括酶混合液，包括热启动Taq酶、逆转录酶、尿嘧啶糖基化酶（UNG）；其中热启动Taq酶的用量为3-8U/人份，逆转录酶的用量为3-8U/人份，尿嘧啶糖基化酶的用量为0.05-0.2U/人份。

10.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，还包括空白对照和阳性对照；

所述空白对照为无RNA 酶的水；

所述阳性对照：2019-nCoV ORF1ab基因质粒，浓度为1.0×10⁵ copies/ml；2019-nCoV N基因质粒，浓度为1.0×10⁵ copies/ml；甲型流感病毒质粒，浓度为1.0×10⁵ copies/ml；乙型流感病毒质粒，浓度为1.0×10⁵copies/ml；呼吸道合胞病毒质粒，浓度为1.0×10⁵ copies/ml；内标质粒，浓度为1.0×10⁴copies/ml。