[发明专利]一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的方法

权利要求书

1.一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的质粒，其特征在于：所述质粒以大肠杆菌为载体，转化了该质粒的克隆菌株的保藏编号为CGMCC No.19437。

2.定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的一组核苷酸序列，其特征在于：具有序列表SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

3.一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的试剂，其特征在于：含有质粒标准品、检测HTLV-1和RPPH1的探针序列及引物序列；其中质粒以大肠杆菌为载体，转化了该质粒的克隆菌株的保藏编号为CGMCC No.19437。

4.根据权利要求3所述的一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的试剂，其特征在于：所述检测HTLV-1和RPPH1的探针序列及引物序列为实时荧光定量qPCR体系所用探针和引物。

5.根据权利要求3或4所述的一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的试剂，其特征在于：检测HTLV-1和RPPH1的引物序列及探针序列具有序列表SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.6所示的核苷酸序列。

6.一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的方法，其特征在于：使用质粒模板、引物和探针序列，进行实时荧光定量qPCR反应，得到样本中的人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的含量。

7.根据权利要求6所述的一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的方法，其特征在于：所述质粒以大肠杆菌为载体，转化了该质粒的克隆菌株的保藏编号为CGMCC NO.19437。

8.根据权利要求6所述的一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的方法，其特征在于：所述引物和探针具有序列表SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

9.根据权利要求6至8中任何一项所述的一种定量检测人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，提取待测样本的基因组DNA；

S2，实时荧光定量qPCR反应：将预混液、HTLV-1和内参RPPH1的引物和探针按照下表浓度放在同一qPCR管体系中，对5×10⁸～1copies/μL的质粒标准品以及待检样本的进行扩增；

S3，制作标准曲线(以5×10⁸～1copies/μL的质粒标准品制作标准曲线)：以质粒标准品拷贝数的log10为横坐标，Ct值为纵坐标，构建标准曲线方程，得出HTLV-1基因和RPPH1内参基因qPCR的标准曲线；

S4，测定待测样品中HTLV-1的含量：将待检测样本的gDNA的HTLV-1基因和RPPH1内参基因扩增后得出的平均Ct值带入标准曲线，得到X1和X2，计算待检样本的HTLV-1拷贝数N(copies/100cell)＝2×10^(X1-X2)×100。