[发明专利]一种窖泥微生物分离方法

权利要求书

1.一种窖泥微生物分离方法，其特征在于：

步骤①：以五点采样法采集窖池内的窖泥，将采集到的窖泥迅速放入厌氧袋中，置于冰上运输至实验室；

步骤②：称取窖泥样品，加入盛有无菌水及玻璃珠的三角瓶中，在回旋式振荡机中震荡，得到窖泥悬浮液；

步骤③：将窖泥悬浮液经过水浴加热杀死营养体细胞，接种于富集培养基中，富集培养，将富集培养液采用梯度稀释涂布于分离培养基中，接种后的分离培养基置于厌氧罐内，分离培养，对各种不同特征的菌落进行平板划线纯化，获得单菌落；

步骤④：将获得的单菌落划线分离纯化2～3次，斜面保存，将分离的菌株进行己酸菌鉴定，获得己酸菌。

2.根据权利要求1所述的一种窖泥微生物分离方法，其特征在于：步骤③中所述富集培养基为酒糟浸液培养基，所含组分按质量份计为：酒糟浸液1000份，黄土50～150份，酵母膏10～15份，NaAc3～5份，乙醇10～20份，MgSO₄·7H₂O 0.1～0.3份，CaCO₃5～10份，聚谷氨酸10～30份、蔗糖酯5～15份。

3.根据权利要求2所述的一种窖泥微生物分离方法，其特征在于：所述酒糟浸液制备方法为：取发酵车间窖底酒糟，用纯净水浸泡1～2h，然后用双层纱布过滤得到酒糟浸液。

4.根据权利要求1所述的一种窖泥微生物分离方法，其特征在于：所述步骤③所述分离培养基所含组分按质量份计为：水1000份，酵母膏2～4份，牛肉膏5～15份，蛋白胨5～15份，琼脂15～20份，可溶性淀粉1～3份，葡萄糖4～6份，半胱氨酸盐酸盐0.3～0.6份，NaCl 1～5份，姜黄素2～6份，乙酸铜3～9份。

5.根据权利要求1所述的一种窖泥微生物分离方法，其特征在于：所述步骤③中，挑选产气早、气泡多的富集培养基，将所述富集培养基经过水浴加热处理后，经过稀释涂布于分离培养基中。

6.根据权利要求1所述的一种窖泥微生物分离方法，其特征在于：所述步骤④中鉴定试验过程为：取己酸菌株液于试管中，加硫酸铜溶液，乙醚，振荡，静置使之反应分层，观察乙醚层呈现颜色，如呈现绿色，颜色越深，己酸产量越高，选择己酸产量高的菌株。

7.根据权利要求6所述的一种窖泥微生物分离方法，其特征在于：对所述己酸含量高的菌株进行扩大培养后应用于人工窖泥的制作。