[发明专利]一种窖泥微生物分离方法

说明书

本发明属于微生物分离技术领域，公开了一种窖泥微生物分离方法，包括步骤①：以五点采样法采集窖泥；步骤②：称取10g窖泥样品，制备成窖泥悬浮液；步骤③：将窖泥悬浮液经过水浴后，接种于富集培养基中，将富集培养液采用梯度稀释涂布于分离培养基中，接种后的分离培养基置于厌氧罐内，分离培养，对各种不同特征的菌落进行平板划线纯化，获得单菌落；步骤④：将获得的单菌落划线分离，将分离的菌株进行己酸菌鉴定。采用酒糟浸液作为培养基可模拟微生物原生生长环境，使窖泥中的微生物能迅速适应新环境，缩短了微生物的活化时间，可提高微生物分离效率。

技术领域

本发明属于微生物分离技术领域，特别涉及一种窖泥微生物分离方法。

背景技术

生产浓香型酒，窖泥是基础，大曲是动力，工艺是关键。做浓香型优质酒，首先要抓好窖泥质量。窖泥的好坏直接决定着酒质的优劣。因为窖泥是己酸菌、甲烷菌、丁酸菌等各种有益物的载体和栖息场所，也是它的繁衍温床，这些有益微生物的种类和数量的多少是衡量窖泥质量的一个标准。浓香型大曲酒的主体香味物质是己酸乙酯，而己酸乙酯是由窖泥中梭状芽孢杆菌(己酸菌)等各种生香产酯微生物的代谢产物，所以没有好的窖泥，就不能生产上乘的浓香型优质酒，“百年老窖”出好酒也就是这个道理。

用于窖泥养护的最重要产品是己酸菌以及可以产生丰富白酒风味物质的生香酵母产品，从窖泥中分离出这些微生物就可人工快速制作出新窖泥。目前通常采用80℃水浴加热的方法将对窖泥样品进行预处理，因为己酸菌的孢子具有耐热性，而其营养细胞是不耐热的，通过加热可以淘汰较弱的芽孢，并同时杀灭营养细胞和其他杂菌，但是窖泥中微生物种类繁多，耐热的孢子种类也较多，只采用水浴加热的方法筛选己酸菌难以将其他杂菌筛除干净，导致菌种的分离纯化过程需要对许多样品进行分离鉴定，操作繁琐，效率较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种窖泥微生物分离方法，具有操作简单，菌种分离效率高，分离得到的己酸菌纯度高、活性高的效果。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

步骤①：以五点采样法采集窖池内的窖泥，将采集到的窖泥迅速放入厌氧袋中，置于冰上运输至实验室；

步骤②：称取窖泥样品，加入盛有无菌水及玻璃珠的三角瓶中，在回旋式振荡机中震荡，得到窖泥悬浮液；

步骤③：将窖泥悬浮液经过水浴加热杀死营养体细胞，接种于富集培养基中，富集培养，将富集培养液采用梯度稀释涂布于分离培养基中，接种后的分离培养基置于厌氧罐内，分离培养，对各种不同特征的菌落进行平板划线纯化，获得单菌落；

步骤④：将获得的单菌落划线分离纯化2～3次，斜面保存，将分离的菌株进行己酸菌鉴定，获得己酸菌。

本发明的进一步设置为：步骤③中所述富集培养基为酒糟浸液培养基，所含组分按质量份计为：酒糟浸液1000份，黄土50～150份，酵母膏10～15份，NaAc3～5份，乙醇10～20份，MgSO₄·7H₂O 0.1～0.3份，CaCO₃5～10份，聚谷氨酸10～30份、蔗糖酯5～15份。

本发明的进一步设置为：所述酒糟浸液制备方法为：所述酒糟浸液制备方法为：取发酵车间窖底酒糟，用纯净水浸泡1～2h，然后用双层纱布过滤得到酒糟浸液。

本发明的进一步设置为：所述步骤③所述分离培养基所含组分按质量份计为：所述步骤③所述分离培养基所含组分按质量份计为：水1000份，酵母膏2～4份，牛肉膏5～15份，蛋白胨5～15份，琼脂15～20份，可溶性淀粉1～3份，葡萄糖5份，半胱氨酸盐酸盐0.5份，NaCl1～5份，姜黄素2～6份，乙酸铜3～9份。

本发明的进一步设置为：所述步骤③中，挑选产气早、气泡多的富集培养基，将所述富集培养基经过水浴加热处理后，经过梯度稀释涂布于分离培养基中。